14. （2021 届辽宁省大连市高三 1 月（八省联考）双基测试生物试题）微生物发酵可用于食
品加工，下列有关叙述错误的是（ ）
A. 葡萄酒发酵的温度若超过 30℃，则需要采取适当的降温措施
B. 制作果酒时，向果汁中加入一定量蔗糖，可提高果酒酒精含量
C. 从果醋中分离出的菌种可用于制作酸奶或泡菜
D. 制作果醋时，应持续向发酵装置中通入洁净空气
【答案】C
【解析】
【分析】
酵母菌是兼性厌氧菌，在无氧的环境中酵母菌把糖分解成酒精和二氧化碳，在有氧的情况下
酵母菌生长繁殖速度快，把糖分解成二氧化碳和水；醋酸菌属于异养需氧菌；乳酸菌属于异
养厌氧菌。
【详解】A、酒精发酵的最佳温度是在 18℃～25℃，若发酵过程中温度高于 30℃，则需及
时采取降温措施，主要是为了防止酒的风味不佳，A 正确；
B、制作果酒时，向果汁中加入一定量蔗糖，既可以增加糖的含量 , 又可以借助酵母菌将蔗
糖转化为酒精而提高果酒的酒精含量，B 正确；
C、从果醋中分离出的菌种属于需氧菌，不能产生乳酸，所以不能用于制作酸奶，C 错误；
D、醋酸菌为需氧菌， 制作果醋时，应持续向发酵装置中通入无菌空气，D 正确。
故选 C。
15. （2021 届辽宁省大连市高三 1 月（八省联考）双基测试生物试题）下列关于微生物培养
的叙述错误的是（ ）
A. 为获得纯净培养物，倒平板前要对培养基进行高压蒸汽灭菌处理
B. 接种方法可以选择平板划线、稀释涂布平板、穿刺接种等方法
C. 从土壤中分离分解尿素的细菌时可以不需要进行对照实验
D. 将菌液与甘油充分混匀置于-20℃冷冻箱中可以长期保存优质菌种
【答案】C
【解析】
【分析】
微生物培养基的主要营养物质有碳源、氮源、水和无机盐等，有的还需要生长因子等特殊的
营养，微生物培养的关键是无菌操作，筛选和分离微生物常用的接种方法有稀释涂布平板法
和平板划线法。
【详解】A、配制培养基倒平板前，需要对培养基进行高压蒸汽灭菌，A 正确；
B、常用的接种方法有平板划线、稀释涂布平板、穿刺接种等方法，B 正确；
C、从土壤中分离分解尿素的细菌时需要对照，将土壤中的提取液接种到完全培养基上，观
察培养基是否起到选择作用，C 错误；
D、将菌液与甘油充分混匀置于-20℃冷冻箱中是甘油管藏发，可以长期保存优质菌种，D 正
确。
故选 C。
11. （2021 届陕西省宝鸡市高考模拟检测（一）理综生物试题）人类利用徽生物发酵制作果
酒、果醋的历史源远流长。请回答下面相关问题。
（1）果酒发酵的菌种主要是酵母菌，与醋酸菌相比酵母菌属于_____生物。自然发酵中的菌
种来自于附着在葡萄皮上的野生酵母菌，在发酵过程中_____（填“需要”或“不需要”）使用
灭菌技术，这是因为_____。
（2）如图是某研究小组为果酒生产厂设计的发酵罐。为了能高效生产葡萄酒，先打开进气
阀和出气阀通入空气，目的是_____。一段时间后关闭进、出气阀进行无氧发酵。为了防止
发酵罐中压力过大，发酵中需要_____。
（3）研究小组中有成员建议将发酵中用到的菌种进行重复利用，这样可以降低生产成本。
根据固定化技术，最好采用_____法固定酵母细胞。
（4）研究发现：经葡萄里面的糖分自然发酵而成的酒精，一般在 10%~13%为最佳，发酵时
的温度和时间会影响果酒发酵产生酒精的含量。为了找到适合生产的最佳发酵温度和时间。
请你设计出探究的思路。
_____。
【答案】 (1). 真核 (2). 不需要 (3). 在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生
长繁殖，而绝大多数其他微生物会受到抑制 (4). 促进酵母菌快速繁殖 (5). 每隔一定
时间打开一次出气阀放气。 (6). 包埋法 (7). 设置不同的温度，分别在不同发酵时间
测定发酵液中酒精的含量，酒精含量最快达到 10%～13%的温度和相应时间为最佳。
【解析】
【分析】
1、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当
氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇
变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
2、植物芳香油的提取方法：蒸馏法、压榨法和萃取等：
（1）蒸馏法：芳香油具有挥发性．把含有芳香油的花、叶等放入水中加热，水蒸气能将挥
发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物；冷却后，油水混合物又会重新分成油层和水
层，除去水层便得到芳香油，这种提取方法叫蒸馏法。根据蒸馏过程中原料放置的位置的标
准，将水蒸气蒸馏法划分为水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏。
（2）萃取法：这种方法需要将新鲜的香花等植物材料浸泡在乙醚、石油醚等低沸点的有机
溶剂中，是芳香油充分溶解，然后蒸去低沸点的溶剂，剩下的就是芳香油。
（3）压榨法：在橘子、柠檬、甜橙等植物的果皮中，芳香油的含量较多，可以用机械压力
直接榨出，这种提取方法叫压榨法。
【详解】（1）与醋酸菌相比酵母菌属于真核生物。由于在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌
可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物无法适应这一环境而受到抑制，故发酵过程中不需要
使用灭菌技术。
（2）发酵初期，需打开通气阀向发酵罐通入适量无菌空气，目的是促进酵母菌大量繁殖。
一段时间后需关闭通气阀，以利于酒精发酵。为了防止发酵罐中压力过大，发酵中需要每隔
一定时间打开一次出气阀放气。
（3）为了使发酵中用到的菌种进行重复利用，可以采用固定化技术，固定化酵母细胞常采
用包埋法。
（4）为了找到适合生产的最佳发酵温度和时间，可以设置不同的温度，分别在不同发酵时
间测定发酵液中酒精的含量，酒精含量最快达到 10%～13%的温度和相应时间为最佳。
【点睛】本题综合考查果酒的制备，要求考生识记参与果酒制备的微生物及其代谢类型，掌
握果酒制作的原理及条件，能结合所学的知识准确答题。
11. （2021 届云南省昆明市云南师大附中高三高考适应性月考卷（六）理综生物试题）草食
动物的粪便中存在大量的纤维素分解菌。科研人员对家兔新鲜粪便中纤维素分解菌进行了分
离和筛选，其实验流程如下：粪便取样→梯度稀释→涂布培养→划线培养→将得到的菌株接
种于以纤维素为唯一碳源的培养基上培养→加入刚果红染料进行筛选。
回答下列问题：
（1）纤维素分解菌能分解纤维素的原因是其能合成______________。
（2）从家兔新鲜粪便中分离并筛选纤维素分解菌最好在______________（填“有氧”或“无
氧”）条件下进行，原因是
______________________________________________________________________。
（3）在涂布培养或划线培养时所用培养基均为牛肉膏蛋白胨培养基，其中蛋白胨可为微生
物提供的营养物质是_______________。在制作该培养基时应使用的灭菌方法是
________________。
（4）以纤维素为唯一碳源的培养基具有选择作用，其机理是
______________________________。
（5）加入刚果红染料一段时间后将其倒去，然后加入_______________溶液，15 分钟后倒
掉该溶液，在培养基上周围有_______________的菌落即为纤维素分解菌形成的菌落。
【答案】 (1). 纤维素酶 (2). 无氧 (3). 家兔新鲜粪便中的纤维素分解菌大多为厌
氧菌 (4). 碳源、氮源和维生素 (5). 高压蒸汽灭菌 (6). 该培养基允许纤维素分解
菌的生长，同时会抑制或阻止其他种类微生物的生长 (7). 氯化钠 (8). 透明圈
【解析】
【分析】
1、纤维素分解菌的筛选方法：刚果红染色法。通过颜色反应直接对微生物进行筛选。
2、刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理：刚果红是一种染料，可以与像纤维素这样的多
糖物质形成红色复合物，但不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当我们在含有纤
维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被
纤维素酶分解后，刚果红－纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为
中心的透明圈。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
3、分离分解纤维素的微生物的实验流程
土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生
透明圈的菌落
【详解】（1）纤维素可以被纤维素酶分解，纤维素分解菌自身可以合成纤维素酶，所以纤维
素分解菌才能分解纤维素。
（2）家兔肠道中为无氧环境，家兔粪便中的纤维素分解菌是厌氧型细菌，所以要在无氧条
件下进行筛选，以确保筛选到的是肠道中的细菌。
（3）蛋白胨含多种有机物，可以为微生物提供碳源、氮源、维生素等营养物质。制作该培
养基时一般采用高压蒸汽灭菌法。
（4）酶具有专一性，能够产生纤维素酶的细菌能够分解利用纤维素。以纤维素作为唯一碳
源，则产纤维素酶的细菌可以生存。其它不能产生纤维素酶的细菌因缺少碳源而死亡。
（5）刚果红是一种染料，可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但不和水解后
的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红
能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红－纤维素的复
合物就无法形成，因此加入 1mol/L 氯化钠溶液洗去多余的刚果红染料后，周围纤维素已经
被分解的部位会出现透明圈，即周围有透明圈的菌落为纤维素分解菌形成的菌落。
【点睛】考察重点：实验室微生物的培养和分离。
25. （2021 年高考八省大联考最新题型辽宁省适应性考试生物试题）富集培养主要是指利用
不同微生物生命活动特点的不同，限定环境条件，使仅适应该条件的微生物旺盛生长，从而
使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。下
图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物——对羟基苯甲酸的微生物的实验
过程。
请分析回答：
（1）本实验所需培养基的碳源为_____________，该碳源进入细菌细胞内的主要作用是
______________________（答出两点即可）。
（2）培养基含有 KH2PO4 和 Na2HPO4，其作用有_______________（答出两点即可）。
（3）①→③重复培养的目的是__________________________。
（4）培养 20 小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明样品中有多种分解对
羟基苯甲酸的细菌，依据是______________________________。⑥为_____________组，设
置的目的是说明通过富集培养的确得到了欲分离的目标微生物。
（5）若要测定⑦培养液中的菌体数，可在显微镜下，用_____________直接计数；若要测定
其活菌数量，可选用_____________法进行计数。
【答案】 (1). 对羟基苯甲酸 (2). 为细胞生物生命活动提供能量，为其他有机物的合
成提供原料 (3). 为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中 pH 稳定
(4). 增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例 (5). 不同菌种在相同条件下形成的菌落特征
不同 (6). 对照组 (7). 血细胞计数板 (8). 稀释涂布平板法
【解析】
【分析】
选择培养基的原理是：不同微生物在代谢过程中所需要的营养物质和环境不同。有的适于酸
性环境，有的适于碱性环境；不同微生物对某些化学药品的抵抗力不同。利用这些特点，我
们便可配制出适于某些微生物生长而抑制其他微生物的选择培养基。例如从土壤中分离放线
菌时，可在培养基中加入 10%的酚数滴，抑制细菌和真菌的生长；如培养酵母菌和霉菌，
可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度的食盐。
【详解】（1）本实验目的是要分离能降解对羟基苯甲酸的微生物，故应该用以对羟基苯甲酸
为唯一碳源的培养基；该碳源进入细菌细胞内的主要作用是为细胞生物生命活动提供能量，
为其他有机物的合成提供原料。
（2）培养基含有 KH2PO4 和 Na2HPO4，其作用主要由以下两个方面：为细菌生长提供无机
营养；作为缓冲剂保持细胞生长过程中 pH 稳定。
（3）①→③重复培养的目的是扩大培养，以增大分解对羟基苯甲酸的微生物的比例。
（4）一定条件下，同种细菌形成的菌落特征是相同的，因此培养 20 小时后，观察到平板上
有形态和颜色不同的菌落，这说明样品中有多种分解对羟基苯甲酸的细菌；由题图可知：⑥
在没有该底物的培养基中不能生长，说明为对照组，设置的目的是说明通过富集培养的确得
到了欲分离的目标微生物。
（5）对微生物计数时可在显微镜下用血细胞计数板直接进行计数；若要测定培养液中的活
菌数量，可用稀释涂布平板法计数。
【点睛】本题结合图解，考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的营养构成及种类；
识记接种微生物的方法，能结合图中和题中信息准确答题。
25. （2021 年重庆市普通高等学校招生全国统一考试模拟演练生物试题） 2020 年世界性的
新型冠状病毒肺炎大流行，为了能更好地对病毒展开相关研究，科学家需要分离和培养病毒。
如图是其流程示意图：
（1）将采集到的病毒样本进行稀释，如图所示，用____________________吸取 100μL 的病
毒样本，注入到①中，使样本与稀释液充分混匀，依次操作后，④号试管中病毒浓度是样本
的____________________倍。
（2）分离病毒标本需要无菌操作的原因____________________。是根据病毒的特征，培养
体系 A 中必须含有____________________，病毒才能繁殖。
（3）为鉴定 B 是目标病毒，需进行____________________检测或抗原抗体检测，两种检测
的原理分别是____________________和____________________。
（4）实验结束后，对所有废弃物必须进行____________________处理。
【答案】 (1). 移液管 (2). 10-8 (3). 防止其它微生物对实验造成影响 (4). 活细
胞 (5). 核酸检测 (6). 每一种生物的核酸都具有特异性，都有特定的核苷酸序列，都
遵循碱基互补配对原则 (7). 抗原、抗体的特异性结合 (8). 灭菌
【解析】
【分析】
稀释的过程：
1、将分别盛有 9ml 水的 6 支试管灭菌，并按 101 到 106 的顺序进行编号；
2、用移液试管吸取 1ml 培养的菌夜，注入 101 倍稀释的试管中，用手指轻压移夜管上的橡
皮，吹吸三次，使菌液与水充分混匀；
3、从 101 倍稀释的试管中吸取 1ml 稀释液，注入 102 倍稀释的试管中，重复第二步的混匀操
作，以此类推，直到完成最后一支试管的稀释。注意：移夜管需要经过灭菌，操作时，试管
口和移夜管应在离火焰 1~2cm 处。
【详解】（1）识图分析可知，该图将采集到的病毒样本进行稀释操作，操作过程中利用移液
管吸取 100μL 的病毒样本，注入到①中，使样本与稀释液充分混匀，每次操作后样本稀释
了 100 倍，因此依次操作后，④号试管中病毒被稀释了 108，因此病毒的浓度是样本的 10-8
倍。
（2）进行微生物的培养过程中，做到无菌操作是培养的关键。因此为了防止其它微生物（杂
菌）对实验造成的影响，分离病毒标本需要无菌操作。病毒全部营寄生生活，病毒必须在活
的宿主细胞内才能进行表现出生命活动，因此培养体系 A 中必须含有活的宿主细胞，病毒
才能繁殖。
（3）鉴定病毒可以采用核酸检测法或抗原抗体检测，核酸检测的原理是每种生物的核酸都
具有特异性的特点，且都遵循碱基互补配对原则，因此依据核酸中核苷酸特定的序列进行检
测，抗原抗体检测法的原理是：依据抗体可以和抗原进行识别并发生特异性结合的原理。
（4）实验结束后，对所有废弃物必须进行灭菌处理，防止病毒带出实验室对生物以及人类
健康等造成影响。
【点睛】本题以新型冠状病毒为背景，考查微生物的分离和培养的过程，要求学生掌握稀释
涂布平板法的操作过程和注意事项，把握微生物培养过程中操作的要点和目的，理解病毒的
特点和鉴定的方法及原理，识记灭菌的意义，能够结合题意和所学是知识点解决问题。
20. （辽宁省葫芦岛市 2020-2021 学年高三上学期期末生物试题）传统发酵食品的制作需要
各种各样的微生物。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 腌制泡菜利用了乳酸菌的乳酸发酵
B. 制作腐乳利用了毛霉等产生的蛋白酶
C. 制作果酒利用了酵母菌在无氧条件下产生酒精
D. 制作果醋利用了醋酸菌在无氧条件下产生醋酸
【答案】D
【解析】
【分析】
1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。
2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当
氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变
为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
3、参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，其新陈代谢类型是异养需氧型。腐乳制作的原理：
毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂
肪分解成甘油和脂肪酸。
4、泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳
酸。
【详解】A、在无氧条件下，乳酸菌能将葡萄糖分解成乳酸，腌制泡菜利用了乳酸菌的乳酸
发酵，A 正确；
B、参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，制作腐乳利用了毛霉等产生的蛋白酶、脂肪酶，B
正确；
C、酵母菌在无氧条件下，可通过无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，制作果酒利用了酵母菌在
无氧条件下产生酒精，C 正确；
D、制作果醋利用了醋酸菌在有氧条件下产生醋酸，D 错误。
故选 D。
24. （辽宁省葫芦岛市 2020-2021 学年高三上学期期末生物试题）用稀释涂布平板法来统计
样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，原因是（ ）
A. 菌落中的细菌数目是固定的
B. 平板上的一个菌落就是一个细菌
C. 通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同
D. 平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
【答案】D
【解析】
【分析】
稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形
成单个菌落。
【详解】用稀释涂布平板法进行微生物计数时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面的一
个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约
含有多少活菌，D 正确。
故选 D。
11. （西藏 2020-2021 学年高三上学期第四次月考理综生物试题）在 20 世纪 50 年
代，酶已经大规模地应用于各个生产领域，到了 70 年代又发明了固定化酶与固定化细胞的
技术。
（1）在实际生产中，固定化酶技术的优点_____。
与固定化酶技术相比，固定化细胞固定的是_____酶（一种或一系列）。
（2）制备固定化酵母细胞，常用的包埋材料是_____，使用了下图中方法[ ]_____（填
出号码与名称）。
（3） 制作固定化酵母细胞时，充分混合均匀的酵母细胞胶液可在饱和_____溶液中形成凝
胶珠。部分同学实验制得的凝胶珠不是圆形或椭圆形，其主要原因是_____。
【答案】 (1). 可以循环使用 (2). 一系列 (3). 海藻酸钠 (4). 3 包埋法 (5).
氯化钙 (6). 海藻酸钠浓度过高
【解析】
【分析】
固定化酶和固定化细胞技术是利用物理或化学的方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术。
包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。固定化酶优点是使酶既能与反应物接触，又能与产
物分离，还可以被反复利用。固定化细胞优点是成本更低，操作更容易，可以催化一系列的
化学反应。
【详解】（1）在实际生产中，固定化酶技术的优点是酶既容易与反应物接触，又容易与产物
分离，固定在载体上的酶能反复利用。与固定化酶技术相比，固定化细胞固定的是多酶系统
（或一系列酶、多种酶）。
（2）制备固定化酵母细胞，由于细胞体积大，难以被吸附或结合，多采用包埋法，常用的
载体是海藻酸钠。据图分析，图中方法③是包埋法。
（3）制作固定化酵母细胞时，充分混合均匀的酵母细胞胶液可在饱和氯化钙溶液中形成凝
胶珠。部分同学实验制得的凝胶珠不是圆形或椭圆形，其主要原因是藻酸钠浓度过高。
【点睛】本题结合图示主要考查固定化酶和固定化细胞技术，意在考查考生的识图能力和理
解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能运用所学知识，对生物学问题作出准确的
判断。
21. （重庆市一中 2020-2021 学年高三上期第四次月考生物试题）玫瑰精油是制作高级香水
的主要成分，能使人产生愉悦感｡回答关于玫瑰精油提取的问题：
（1）玫瑰精油具有化学性质稳定､难溶于水､_______________的特点，一般采用水蒸气蒸馏
法进行提取，该方法有水中蒸馏､水上蒸馏和水气蒸馏等方式，其中简单易行的是
_______________｡
（2）提取玫瑰精油的实验流程：鲜玫瑰花+清水→水蒸气蒸馏→油水混合物→加入 A→加入
B→过滤，得到玫瑰油｡其中玫瑰花瓣与清水的质量比是____________，A 是____________，
其作用是__________________，加入 B 的作用是___________________｡
（3）右图是蒸馏装置图，该装置图的安装顺序是____________________，如果冷水从图中
的出水口进入从进水口流出，则___________________｡
【答案】 (1). 易溶于有机溶剂 (2). 水中蒸馏 (3). 1：4 (4). NaCl (5). 增
大盐水密度，促进玫瑰油与水分层
(6). 吸收精油中残留的水分 (7). 从下到上，从左到右 (8). 导致冷凝不充分（使
部分玫瑰精油随蒸汽丢失，还可能会导致冷凝管因局部温差过大而损坏）
【解析】
【分析】
玫瑰精油的提取：
（1）玫瑰精油的性质：化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸气一同蒸馏。
（2）提取流程
①在开花的盛期（时期）采收玫瑰花瓣，与清水以质量比为 1：4 的比例进行混合。
②在水蒸气蒸馏装置中进行蒸馏，在锥形瓶中收集到乳白色（颜色）的乳浊液。
③向乳化液中加入 NaCl，增加盐的浓度，静置，出现油水分层。
④用分液漏斗将其两层分开，得到油层。⑤向油层中加入一些无水硫酸钠吸水，静置约 12h，
过滤得到的液体为玫瑰油。
【详解】（1）玫瑰精油化学性质稳定､难溶于水､易溶于有机溶剂，一般采用水蒸气蒸馏法对
其进行提取。水蒸气蒸馏法有水中蒸馏､水上蒸馏和水气蒸馏三种方式，其中，水中蒸馏简
单易行｡
（2）在“鲜玫瑰花+清水→水蒸气蒸馏→油水混合物→加入 A→加入 B→过滤，得到玫瑰油”
实验流程中，玫瑰花瓣与清水的质量比是 1：4；A 是 NaCl，能增大盐水密度，促进玫瑰油
与水分层；B 是无水 Na2SO4，能吸收精油中残留的水分｡
（3）蒸馏实验装置的安装原则是从下到上，从左到右。冷凝管从下端进水，上端出水是为
了确保冷凝充分并保护冷凝管，防止其因温差过大而损坏（上端进水时，冷凝管上端温差会
增大）。如果冷水从图中装置的出水口进入从进水口流出，会导致冷凝不充分，使部分玫瑰
精油随蒸汽丢失，还可能会导致冷凝管因局部温差过大而损坏。
【点睛】掌握玫瑰精油的提取流程、原理，能组装蒸馏装置，清楚装置各组件的功能，并用
其解决问题。
（四川省成都市七中 2020-2021 学年高三上学期期末生物试题）1. 大熊猫每天要吃大量的
冷箭竹，但一般只能利用其中一小部分纤维素，研究表明，大熊猫的基因组缺少编码纤维素
酶的基因，但是肠道中有多种纤维素分解菌。基于上述信息判断，下列说法正确的是（ ）
A. 大熊猫、冷箭竹、纤维素分解菌都是由细胞构成的
B. 三种生物可形成食物链：冷箭竹→纤维素分解菌→大熊猫
C. 大熊猫的液泡中因缺少纤维素酶而不能分解、利用纤维素
D. 组成大熊猫的细胞与组成冷箭竹的细胞不同是细胞分化的结果
【答案】A
【解析】
【分析】
由题意可知，大熊猫依赖肠道中纤维素分解菌群消化纤维素，纤维素分解菌则吸收大熊猫的
营养物质，因此两者的种间关系为互利共生。食物链包含的成分只有生产者和消费者，没有
分解者。
【详解】A、除病毒外，动植物，细菌等生物生命活动的结构和功能的基本单位都是细胞，
A 正确；
B、食物链指由捕食关系所构成，由低营养级→高营养级，分解者不参与构成，B 错误；
C、高等动物一般无液泡，且液泡的主要功能为储存营养物质，而不是分解利用物质，C 错
误；
D、两者细胞的差异主要是因为遗传物质不同造成的，不属于细胞分化的范畴，D 错误。
故选 A。
（临汾市 2021 年高考考前适应性训练考试（一））2. 某化工企业产生的工业废水中含有一
种有机物甲，直接排放会污染水质或土壤，现需能降解物质甲的细菌来净化水质。请利用所
学知识完成以下问题。
（1）应将采集的土壤样本接种于以______________为唯一碳源的选择培养基中进行培养，
培养基使用前需经______________法灭菌处理。纯化菌种时，虽然有不同的接种方法，但都
是通过________________最终得到______________。
（2）若所得菌种只能生活在含有赖氨酸的培养基上，从养分上讲，赖氨酸是该菌的
___________试从细胞代谢角度分析该菌依赖赖氨酸的原因_____________。
（3）净化水质可通过_____________法固定使菌种反复使用。
【答案】 (1). 有机物甲 (2). 高压蒸汽灭菌 (3). 充分稀释 (4). 由一个细胞繁
殖而来的菌落 (5). 特殊营养物质 (6). 赖氨酸是该菌合成蛋白质必需的氨基酸，且该
菌自身不能合成赖氨酸 (7). 包埋
【解析】
【分析】
1、常用的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法；对微生物进行分离、计数常用的接种
方法是稀释涂布平板法，估算每毫升样品中的细菌数时。
2、灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子），包括灼烧灭
菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等需要灭菌。消毒是使
用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）。包括
煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法。
【详解】（1）实验目的为获得“降解物质甲的细菌”，故应将采集的土壤样本接种于以有机物
甲为唯一碳源的选择培养基中进行培养；培养基等多种器材用高压蒸汽灭菌法灭菌；纯化菌
种时，为了得到单一菌落，常采用平板划线法和稀释涂布平板法，均是通过充分稀释最终得
到由一个细胞繁殖而来的菌落。
（2）配制培养基时除了满足基本的营养条件外，还需满足微生物生长对特殊营养物质、pH、
氧气的要求，若所得菌种只能生活在含有赖氨酸的培养基上，从养分上讲，赖氨酸是该菌的
特殊营养物质；赖氨酸是该菌合成蛋白质必需的氨基酸，且该菌自身不能合成赖氨酸，只能
从外界（培养基）获取。
（3）固定细胞常常使用包埋法，是由于细胞体积大，难以被吸附或结合，不容易从包埋材
料中漏出。
【点睛】本题的知识点是微生物培养过程，分离微生物和统计活菌数常用的常用方法，要求
考生具备利用所学的微生物知识解决生活问题的能力。
（安徽省名校联盟高三模拟调研卷(五)）3. 甘薯俗称“红薯”，它含有丰富的糖、蛋白质和缮
食纤维。民间常用甘薯酿酒，从而提高其经济价值。回答下列问题：
（1）为提高甘薯的利用率，在工业化生产时，可加人果胶酶和淀粉酶，其中果胶酶可将果
胶分解为______________________。
（2）利用酵母菌发酵甘薯汁，常需要将温度控制在_______________。
（3）为了提高酵母菌的利用率，研究人员对酵母菌进行了固定化，过程如下：
酵母细胞活化→______→配制海藻酸钠溶液→海藻酸钠溶液与酵母细胞混合→固定化酵母
细胞。海藻酸钠溶化时，最好采用________的方法。上述固定酵母细胞的方法称为_____法。
（4）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，现通过基因工程方法得到了可高效利用淀粉的
工程酵母菌菌种。以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发。
酵一段时间后，接种_________菌的发酵罐需要先排气，其原因是_______________。
【答案】 (1). 半乳糖醛酸 (2). 18~25℃ (3). 配制 CaCl2 溶液 (4). 小火间断加
热 (5). 包埋 (6). 工程酵母 (7). 工程酵母菌利用淀粉能力更强,产生 CO2 速率更
快
【解析】
【分析】
固定化细胞的制备方式是多种多样的，主要是吸附法、包埋法。
吸附法，又叫载体结合法，是依据带电的微生物细胞和载体之间的静电、表面张力和粘附力
的作用，使微生物细胞固定在载体表面和内部形成生物膜。吸附法可分为物理吸附法和离子
吸附法两种。该法操作简单，固定化过程对细胞活性影响小。
包埋法，是将微生物包埋在凝胶的微小格子或微胶囊等有限空间内，微生物被包裹在该空间
内不能离开，而底物和产物能自由地进出这个空间，常用的有凝胶包埋法。纤维包埋法和微
胶囊法。包埋法对细胞活性影响小，它是固定化细胞常用的方法。
【详解】（1）果胶酶可将果胶分解为半乳糖醛酸。
（2）酵母菌适宜的温度在 18~25℃
（3）固定化酵母菌的流程是：
酵母细胞活化→配制 CaCl2 溶液→配制海藻酸钠溶液→海藻酸钠溶液与酵母细胞混合→固
定化酵母细胞。海藻酸钠溶化时，最好采用小火间断加热的方法，避免海藻酸钠焦糊。上述
固定酵母细胞的方法称为包埋法。
（4）接种工程酵母菌的发酵罐需要先排气，因为工程酵母菌利用淀粉能力更强，产生 CO2
速率更快。
【点睛】本题考查酶工程的基本操作，学生只需识记理解即可解题。
（安徽省芜湖市 2020-2021 学年高三上学期期末理综生物试题）4. 以下为培养纤维素分解
菌的两个培养基配方。
配方一：纤维素粉 5g、NaNO3lg、Na2HPO4·7H2O 1.2g、KH2PO40.9g、MgSO4·7H2O 0.5g、
KCl 0.5g、酵母膏 0.5g、水解酪素 0.5g（溶解后用蒸馏水定容到 1000mL）.
配方二：CMC-Na（水溶性的羧甲基纤维素钠）5g、酵母膏 1g、KH2PO40.25g、琼脂 15g、
土豆汁 100ml（溶解后用蒸馏水定容到 1000mL）.
请回答下列问题：
（1）用于筛选纤维素分解菌的选择培养基是配方________判断的依据是________
（2）在制备培养基过程中，倒平板过程需要在酒精灯火焰旁操作，原因是_________
（3）为确定在含纤维素的培养基上是否筛选出了纤维素分解菌，还应该在培养基中加入
_________并观察培养基中是否出现________
（4）利用稀释涂布平板法对微生物计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因
是________
（5）在筛选纤维素分解菌时，将 100mL 培养液稀释 106 倍，取三个无菌平板，分别滴加 0.1mL
稀释液到选择培养基上，经培养后形成 270 个、258 个、252 个菌落，则每毫升原液中有纤
维素分解菌________个。
【答案】 (1). 一 (2). 配方一中纤维素粉是唯一碳源 (3). 避免空气中的杂菌污染
培养基，进行无菌操作 (4). 刚果红 (5). （以纤维素分解菌为中心的）透明圈 (6).
当两个或多个细胞连接在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (7). 2.6×109
【解析】
【分析】
1、纤维素的单体是葡萄糖，纤维素酶能够将纤维素范围葡萄糖。纤维素酶是一种复合酶，
包括 C1 酶、CX 酶和葡萄糖苷酶。纤维素分解菌可以用刚果红染液进行鉴别，能够产生透
明圈的菌落就是纤维素分解菌。
2、测定培养液中微生物的数目，可采用显微镜直接计数（或血细胞计数板计数）法对培养
液中的微生物直接计数，也可用稀释涂布平板法将微生物接种于灭菌后的固体培养基上，培
养一段时间后，通过计数菌落数目计算培养液中微生物的数目。由于采用第一种方法计数时
不能剔除死菌，采用第二种方法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只
是一个菌落，所以第一种方法统计的数目比实际活菌数目高，第二种方法统计的数目比实际
活菌数目低。
3、选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原理而设
计的培养基。具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能。
【详解】（1）纤维素分解菌能产生纤维素酶，纤维素酶分解纤维素，故该分解菌能利用纤维
素作为能源物质，其他不能产生该酶的微生物不能利用纤维素，因此能用于筛选纤维素分解
菌的是选择培养基配方一，判断的依据是该配方一中纤维素粉是唯一碳源，而配方二中还含
有其他碳源，如酵母膏和土豆汁。
（2）在制备培养基过程中，倒平板过程需要在酒精灯火焰旁操作，原因是酒精灯火焰旁属
于无菌区域，这样可以避免空气中的杂菌污染培养基，进行无菌操作。
（3）鉴别纤维素分解菌时应该在培养基中加入刚果红，该物质可与培养基中的纤维素形成
红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为
中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌。
（4）运用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个或多个细
胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
（5）涂布的三个平板的菌落的平均值为（270+258+252）÷3=260 个。每毫升原液中的纤维
素分解菌=260÷0.1×106=2.6×109 个。
【点睛】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的种类和功能；识记计数微生
物的方法，能结合所学的知识准确答题。
（广东省深圳市高级中学 2020-2021 学年高三第三次阶段性测试（10 月）生物试题）5. 日
前,微博传言单位面积上手机细菌比马桶多。如下图所示,央视和北京卫视通过实验展示调查
结果。回答下列相关问题:
(1)该实验需制备培养基,培养基一般都含有水、碳源、________。
(2)据图,两电视台均采用____法接种,该方法需要____。
A.接种环 B.酒精灯 C.移液管 D.涂布器 E.无菌水
(3)通过观察菌落的____,可知手机屏幕和马桶按钮都存在多种微生物。两家电视台实验操作
均正确且完全一致,但报道结果截然不同,你认为原因是什么?__________________。
(4)按图操作取样面积,实验员测定某手机屏幕的细菌数量,将 10 mL 菌悬液进行梯度稀释,分
别取 0.1 mL 稀释倍数为 102 的样品液接种到三个培养基上,培养一段时间后,统计菌落数分别
为 48、50、52,则该手机屏幕的细菌数为____个/平方厘米 。该实验对照组该如何设
置?____________。
【答案】 (1). 氮源和无机盐 (2). 稀释涂布平板 (3). B、C、D、E (4). 形态、
大小 (5). 手机的取样和马桶的取样都不相同 (6). 2×104 (7). 取培养基涂布 0.1
mL 无菌水进行培养
【解析】
【分析】
【详解】试题分析：培养基的成分主要包括水、无机盐、碳源、氮源，培养微生物时还需要
满足微生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。微生物常见的接种的方法：①平板
划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的
开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌
落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养
后可形成单个菌落。
（1）微生物培养基的成分一般包括水、碳源氮源和无机盐。
（2）根据图形分析，该实验的接种方法为稀释涂布平板法，该方法用到的工具有酒精灯、
移液管、涂布器、无菌水等。
（3）不同的菌落形态、大小不同，图示两个电台的手机屏幕和马桶按钮都多种形态的菌落，
即存在多种微生物。两电台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，可能是因为
随机的取样和马桶的取样都不相同。
（4）根据提供的数据进行计算，手机屏幕的细菌数=（48+50+52）÷3×102÷0.1×10÷（5×5）
=2×104 个/平方厘米。对对照组的设置：取培养基涂布 0.1 mL 无菌水进行培养。
【点睛】该梯度难点在于微生物的接种方法，而细菌数目的计算是该题的易错点，关键是注
意手机屏幕的面积是 5×5=25 平方厘米。
（广西桂林市十八中 2020-2021 学年高三上学期第八次月考理综生物试题）6. 2020 年世界
性的新型冠状病毒肺炎大流行，为了能更好地对病毒展开相关研究，科学家需要分离和培养
病毒。如图是其流程示意图：
（1）分离病毒标本需要无菌操作，其原因是____________________。根据病毒的特征，培
养体系 A 中必须含有____________________，病毒才能在其中繁殖。
（2）将采集到的病毒样本进行稀释，如图所示，用____________________吸取 100μL 的病
毒样本，注入到①中，使样本与稀释液充分混匀，依次操作后，③号试管中病毒浓度是样本
的___________倍。
（3）为鉴定 B 是新冠病毒，需进行________________检测或抗原-抗体检测，两种检测的原
理分别是____________________和____________________。
（4）实验结束后，对所有废弃物必须进行____________________处理。
【答案】 (1). 防止其它微生物对实验造成影响（防止杂菌污染） (2). 活细胞 (3).
移液管 (4). 10-3 (5). 核酸 (6). 每一种生物的核酸都具有特异性，都有特定的核苷
酸序列（碱基互补配对原则） (7). 抗原、抗体的特异性结合 (8). 灭菌
【解析】
【分析】
分析图示可知，将样本中 100ul 移植 900ul 稀释液中，则样本被稀释了 10 倍，从①试管内
再取 100ul 移植②试管内，则样品又被稀释了 10 倍，具体可知，样品最后被稀释了 104 倍。
【详解】（1）为防止其它微生物对实验造成影响（防止杂菌污染），所以分离病毒标本需要
无菌操作。病毒没有细胞结构，需要寄生在活细胞内才能增殖，所以培养体系 A 中必须含
有活细胞。
（2）稀释样品时需要用移液管吸取 100μL 的病毒样本，注入到①中，使样本与稀释液充分
混匀，根据上述分析可知，依次操作后，③号试管中病毒浓度是将样本液浓度稀释了 103 倍，
即③号试管中病毒浓度是样本的 10-3 倍。
（3）因为每一种生物的核酸都具有特异性，都有特定的核苷酸序列（碱基互补配对原则）
以及抗原和抗体能发生特异性结合，所以为鉴定纯化的 B 病毒为新冠病毒，还需要进行核
酸检测或抗原-抗体检测。
（4）实验结束后，对所有废弃物必须进行灭菌处理，防止病毒带出实验室对生物以及人类
健康等造成影响。
【点睛】本题以新型冠状病毒为背景，考查微生物的分离和培养的过程，要求学生掌握稀释
的操作过程，把握微生物培养过程中操作的要点和目的，理解病毒的特点和鉴定的方法及原
理，识记灭菌的意义，能够结合题意和所学知识点解决问题。
（贵州省铜仁市思南中学 2020-2021 学年高三第五次月考生物试题）7. 利用传统发酵技术
制作的果酒、果醋、腐乳、泡菜极大地丰富了人们的饮食。回答下列问题。
（1）在葡萄酒自然发酵过程中，起主要作用的菌种来自___________。酵母菌液体培养时，
若通入氧气，可促进___________；若进行厌氧培养，可促进___________。
（2）果醋发酵过程中．适宜的温度为______℃。当缺少糖源时，醋酸菌可以将乙醇作为底
物，将___________（填乙醇转变为醋酸的过程），从而实现醋酸发酵。该过程需在___________
（填“有氧”或“无氧”）条件下进行。
（3）豆腐富含蛋白质和脂肪，由于微生物的作用，腐乳中甘油、脂肪酸及小分子肽、氨基
酸的含量增加，说明这些微生物能产生___________。
（4）泡菜发酵中期，主要是___________（填微生物种类）进行发酵，pH 明显下降，其他
微生物的生长受到抑制。
【答案】 (1). 附着在葡萄皮上的野生型酵母菌 (2). 有氧呼吸，菌体快速增殖 (3).
无氧呼吸，产生乙醇（酒精） (4). 30~35 (5). 乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸 (6).
有氧 (7). 脂肪酶和蛋白酶将脂肪和蛋白质分解 (8). 乳酸菌
【解析】
【分析】
毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂
肪水解成甘油和氨基酸。在多种微生物的协同作用下，普通的豆腐转变成风味独特的腐乳。
【详解】（1）酒精发酵常用的菌种是酵母菌，在葡萄酒自然发酵过程中，起主要作用的菌种
来自附着在葡萄皮上的野生型酵母菌。酵母菌在有氧的条件下，进行有氧呼吸；在缺氧的条
件下，进行酒精发酵，产生酒精。
（2）果醋发酵适宜的温度为 30~35℃。在有氧的条件下，当缺少糖源时，醋酸菌可以将乙
醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，从而实现醋酸发酵。
（3）豆腐富含蛋白质和脂肪，微生物可以产生脂肪酶和蛋白酶，可以将脂肪和蛋白质分解，
故腐乳中甘油、脂肪酸及小分子肽、氨基酸的含量增加。
（4）泡菜发酵中期，主要是乳酸菌进行发酵，pH 明显下降，其他微生物的生长受到抑制。
【点睛】酒精发酵需要在无氧条件下进行，醋酸发酵需要在有氧条件下进行。
（河南省名校联盟 2020-2021 学年高三上学期期末联考理综生物试题）8. 大肠杆菌是动物
肠道中的正常寄居菌，某生物兴趣小组对其进行了微生物培养，据此回答下列问题：
（1）在大肠杆菌的培养过程中，为了防止杂菌污染，应对培养基和培养皿进行_____；同时
悬浮在空气中的细菌可以用_____进行灭杀。
（2）在培养过程中需要添加的营养物质有水、_____、_____和无机盐等；此外还需要渗透
压、_____等条件。
（3）接种以前进行的一系列操作，目的是在培养皿表面形成_____，图示所选择的接种方法
是_____。根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的_____就能大致推测
出样品中的活菌数。
【答案】 (1). 灭菌 (2). 紫外线 (3). 碳源 (4). 氮源 (5). pH、温度 (6).
单个菌落 (7). 稀释涂布平板法 (8). 菌落数
【解析】
【分析】
1、微生物接种常用的两种方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。
在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成
单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可
形成单个菌落。
2、培养基营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生
物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
【详解】（1）微生物培养过程中，为了防止杂菌污染，关键要做到无菌操作，对培养基和培
养皿应进行灭菌。悬浮在空气中的细菌可采用紫外线消毒的方法。
（2）微生物培养过程中需要的营养物质主要有碳源、氮源、水、无机盐等。 此外，还需要
满足微生物生长对渗透压、pH、温度、氧气、及特殊营养物质的需求。
（3）图中所示的操作是稀释涂布平板法，其原理是通过逐步稀释，使培养皿表面最终形成
单个菌落。采用稀释涂布平板法进行微生物接种时，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液
的体积，统计平板上的菌落数就能大致推测出样品中的活菌数。
【点睛】本题主要考查培养基的制作和微生物的接种方法，意在强化学生对实验室的微生物
的培养的相关知识的理解与掌握。
（黑龙江省大庆市 2020- 2021 学年高三上学期实验三部第一次线上教学质量
检测理综生物试题）9. 圆褐固氮菌能将大气中的氮气转化为氨，是异养需氧型的原核生物。
某同学采用稀释涂布平板法从土壤中分离获得圆褐固氮菌。回答下列问题：
（1）为获得单菌落，配制培养基时需加入________________。圆褐固氮菌与硝化细菌在同
化作用过程中最主要的区别在于圆褐固氮菌____________________。用无氮培养基培养圆褐
固氮菌时不能隔绝空气，其原因是_________________________________________________
（答出 2 点即可）。
（2）实验过程中要注意无菌操作，如盛土样的纸袋应进行___________灭菌，涂布器应进行
__________灭菌，稀释土壤溶液要在________________进行。
（3）稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，测定土壤中不同种类微生物的数目往
往需要采用不同的稀释倍数，原因是________________________________________。并且该
方法统计得到的菌落数往往比活菌数低，其原因是_________________________________。
（4）该同学将三个接种了等量同样稀释倍数培养液的培养基置于 37℃的恒温箱中培养。24h
后观察到三个平板上的菌落数目分别为 19、197、215，该结果出现的原因可能是
_______________________。（合理即可）
【答案】 (1). 凝固剂（琼脂） (2). （圆褐固氮菌为异养生物）不能将 CO2 和 H2O
转化为含碳有机物（只能利用现成的有机物） (3). 圆褐固氮菌为需氧型生物、圆褐固氮
菌需要利用空气中的氮气作为氮源 (4). 干热 (5). 灼烧 (6). 酒精灯火焰旁
(7). （单位质量）土壤中不同种类的微生物数量不同 (8). 当两个或多个细胞连在一起时
平板上观察到的只是一个菌落 (9). 涂布第一个平板时涂布器未冷却就涂布平板
【解析】
【分析】
微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，
划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数
逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，
均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】（1）制作平板时，琼脂是实验室中常用的凝固剂；圆褐固氮菌与硝化细菌在同化作
用过程中最主要的区别在于圆褐固氮菌是异养型生物，不能进行化能合成作用将 CO2 和 H2O
转化为含碳有机物，只能利用现成的有机物；由于圆褐固氮菌为需氧型生物，且圆褐固氮菌
需要利用空气中的氮气作为氮源，因此在培养过程中不能隔绝空气。
（2）微生物培养过程中要注意无菌操作，如盛土样的纸袋应进行干热灭菌；涂布器应进行
灼烧灭菌；稀释土壤溶液要在酒精灯火焰旁进行。
（3）稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，由于土壤中不同种类的微生物数量不
同，所以测定土壤中不同种类微生物的数目往往需要采用不同的稀释倍数，以保计数的准确
性；但在实际操作中，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的菌落数要少于细胞数，
导致统计得到的菌落数往往比活菌数低。
（4）若 24h 后观察到三个平板上的菌落数目分别为 19、197、215，第一个平板上的菌落数
显著少于第二、第三个平板，可能是涂布第一个平板时涂布器未冷却就涂布平板，导致部分
细胞在高温下死亡。
【点睛】本题考查微生物培养的相关知识，要求考生能够掌握微生物分离与纯化的方法，学
会对实验的分析，再结合所学知识准确答题。
(陕西省商洛市 2020-2021 学年高三上学期期末教学质量检测理综生物试题)10. 琼脂是一种
多糖类物质，是配制固体培养基常用的凝固剂之一。研究人员发现了一种罕见的细菌，该种
细菌能分解利用琼脂，且该种细菌分泌的脱色酶能分解糖蜜发酵废液中的黑褐色色素。回答
下列问题
（1）琼脂是配制固体培养基最常用的凝固剂，原因包括∶____（填序号）。
①90 ℃以上开始熔化，40 ℃以下开始凝固，常温下呈固态 ②无毒，对培养物不产生影响 ③
用琼脂配制的培养基透明度高 ④很少有微生物能分解琼脂
（2）配制下列培养基时，需要加入适量琼脂的是___（填序号）。
①鉴别培养基 ②选择培养基 ③对目标菌种进行扩大培养的培养基
（3）某生物小组在废弃固体培养基上发现了一个正常生长的细菌菌落，为进一步探究该菌
落是否由能分泌脱色酶且能分解利用琼脂的细菌组成，该小组进行了如下实验∶
实验步骤：①配制以___为唯一碳源并加入从糖蜜发酵废液中提取到的黑褐色色素的固体培
养基。
②采用____法接种上述菌落中的细菌，在适宜条件下进行培养。
③一段时间，观察菌落周围是否形成圆形凹穴和___。
结果分析∶要获得分解琼脂和黑褐色色素能力强的菌株，应选择____的菌落进行扩大培养；
欲长期保存获得的菌种，可以采用__法。
【答案】 (1). ①②③④ (2). ①② (3). 琼脂 (4). 稀释涂布平板（或平板划线）
(5). 透明圈 (6). 结果分析∶凹穴大且周围透明圈大 (7). 甘油管藏
【解析】
【分析】1、琼脂：
（1）作用：是凝固剂，不易分解的，一般不作为营养物质，但是凝固特性比较好，就算营
养物质大部分被吸收它还是固体。
（2）优点：琼脂由于形成凝胶后透明度高、保水性好、无毒、不被微生物液化等优点,逐渐
成为最常用的凝胶剂。
2、固体培养基广泛用于微生物的分离、鉴定、保藏、计数及菌落特征的观察等；半固体培
养基主要用于微生物的鉴定；液体培养基是发酵工业大规模使用的培养基。
【详解】（1）琼脂是配制固体培养基最常用的凝固剂，原因包括①90 ℃以上开始熔化，40 ℃
以下开始凝固，常温下呈固态 ②无毒，对培养物不产生影响 ③用琼脂配制的培养基透明度
高 ④很少有微生物能分解琼脂，故选①②③④。
（2）培养基中加入琼脂就是固体培养基，其作用为鉴别和选择，对目标菌种进行扩大培养
的培养基应该用液体培养基。
（3）要想探究该菌落是否由能分泌脱色酶且能分解利用琼脂的细菌组成，应该配置以琼脂
为唯一碳源的培养基。微生物接种方法为稀释涂布平板（或平板划线），计数必须要用稀释
涂布平板法，不用计数的话两种方法都可以的。本实验的观测指标是是否形成圆形凹穴和透
明圈的大小，如果菌株分解琼脂和黑褐色色素能力强，则凹穴大且周围透明圈大。菌种长期
保存运用甘油管藏法。
【点睛】 本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所
学知识综合分析问题的能力。
（四川省成都市七中 2020-2021 学年高三上期期中理综生物试题）11. 尿素是一种重要的农
业氮肥，通过土壤中某些细菌分解为氨后，被植物吸收利用。某微生物的培养基配方如下：
KH2pO4 NaHPO4 MgSO4·7H2O 蛋白胨 葡萄糖 尿素 琼脂
1．4g 2．1g 0．2g 1．0g 10．0g 1．0g 15．0g
（1）配制上述培养基的过程中，其基本步骤是：计算、称量、溶化、_____，培养基常用的
灭菌方法是_____。
（2）根据培养基的成分分析，其从物理形态上看属于_____培养基，该培养基上生长的细菌
是否都能分解尿素_____（填“是”或“否”），原因是_____。
（3）接种尿素分解菌后的培养基需要倒置培养，原因是_____。
（4）为对分离得到的菌种作进一步的鉴定，常在固体培养基中加入_____指示剂并接种培养，
若菌落周围颜色变成_____，可以初步确定该种细菌为目标菌。
【答案】 (1). 灭菌、倒平板 (2). 高压蒸汽灭菌法 (3). 物理 (4). 否 (5).
培养基中含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，能利用蛋白胨作为氮源的微生物也能生长（或培养
基中含蛋白胨，蛋白胨中含有氮元素，也能为微生物提供氮源；固氮微生物或利用氨作为氮
源的微生物也能生长） (6). 防止培养皿盖上的冷凝水滴入培养基，也可以避免培养基中
的水分过快的挥发 (7). 酚红 (8). 红色
【解析】
【分析】
1、尿素分解菌能合成分解尿素的脲酶。培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌法灭菌。筛选尿素分
解菌的培养基应以尿素作为唯一的氮源，并加入酚红指示剂，由于尿素分解菌能够将尿素分
解为氨而使 pH 升高，酚红指示剂能够与氨反应呈红色，故可以用酚红指示剂检测尿素分解
菌。
2、平板倒置的原因是防止培养皿盖上的冷凝水滴入培养基，也可以避免培养基中的水分过
快的挥发。
【详解】（1）配制上述培养基的过程中，其基本步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，
培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。
（2）由题可知培养基中加入了琼脂，从物理形态上看属于物理培养基，该培养基上生长的细
菌不是都能分解尿素，原因是培养基中含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，能利用蛋白胨作为氮
源的微生物也能生长。
（3）接种尿素分解菌后的培养基需要倒置培养，原因是防止培养皿盖上的冷凝水滴入培养
基，也可以避免培养基中的水分过快的挥发。
（4）为对分离得到的菌种作进一步的鉴定，常在固体培养基中加入酚红指示剂并接种培养，
若菌落周围颜色变成红色，可以初步确定该种细菌为目标菌。
【点睛】本题考查尿素分解菌的筛选，掌握筛选尿素分解菌的基本原理是解答本题的关键。
（四川省成都市七中 2020-2021 学年高三上学期期末生物试题）12. 研究表明艾叶煎液具有
抗细菌和抗真菌的作用。为研究艾叶煎液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌的抑菌能
力，科研人员将若干浸泡了艾叶煎液的无菌圆纸片贴于分别培养有三种菌的平板上，然后将
平板置于恒温培养箱中进行培养，一段时间后，测量抑菌圈直径并求平均值，结果如下表：
大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 黑曲霉菌
抑菌圈直径/mm 6．38 7．65 0
请回答下列问题。
（1）可用_____法将菌液接种在固体培养基上，使菌体均匀分布，该种接种方法包括_____
操作和_____操作。
（2）平板冷凝后需要_____，这样做的目的是_____和防止平板冷凝的水分落入培养基造成
污染。
（3）实验结果说明艾叶煎液对_____的抑制作用最明显。为使实验更具有说服力，应如何设
置对照组？_____。
【答案】 (1). 稀释涂布平板法 (2). 系列稀释 (3). 涂布平板 (4). 倒置 (5).
防止水分挥发过快 (6). 金黄色葡萄球菌 (7). 同时将浸泡了无菌水的相同大小的无
菌圆纸片分别贴于培养了三种菌的平板上
【解析】
【分析】
1、常用的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法。
2、检测化学物质是否具有抑菌作用可以通过观察抑菌圈的大小进行确定，抑菌圈越大抑菌
能力越强，反之则越小。
【详解】（1）常用的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法，其中稀释涂布平板法能
使菌体均匀分布，该种接种方法包括系列稀释操作和涂布平板操作。
（2）平板冷凝后需要倒置，这样做的目的是防止水分挥发过快和防止平板冷凝的水分落入
培养基造成污染。
（3）由于艾叶煎液在平板上扩散使周围的微生物生长受抑制，抑菌能力越强，抑菌圈的直
径越大，故通过抑菌圈直径大小可以判断艾叶煎液的抑菌效果。据表分析可知，艾叶煎液对
金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径最大，抑制能力最强。为使实验更具有说服力，应同时将浸泡
了无菌水的相同大小的无菌圆纸片分别贴于培养了三种菌的平板上，作为对照组。
【点睛】本题结合表格，主要考查微生物的培养，意在强化学生对微生物培养的相关知识的
理解与应用，属于考纲识记和理解层次的考查。
（四川省成都市四川大学附中 2020-2021 学年高三上期期中理综生物试题）13. 牛奶是日常
生活中经常食用的乳制品，对人体健康有很大好处。环保科技兴趣小组从某牛奶厂排污口获
取水样，希望从中筛选出能高效降解蛋口质的细菌。据有关知识回答下列问题：
（1）有人认为食用高温加热的牛奶更易消化，理由是 _____ 。
（2）为实现筛选目的菌，该兴趣小组使用了如下配方的培养液。蛋白质、K2HPO4、KH2PO4、
（NH4）2SO4、CaCl2、NaCl、 MgSO4•7H2O、加水定容。
该配方中，K2HPO4 和 KH2PO4 的作用是_____。
试分析能否将该配方中的蛋白质换成葡萄糖？说明理由。_____。
（3）为实现目的菌株的分离和计数，上述培养基配方中还需加入_____，接种时使用_____
法。
（4）从功能上看，上述所用培养基属于_____，其作用原理是_____。
【答案】 (1). 高温使牛奶中蛋白质分子的空间结构变得伸展、松散，易被蛋白酶水解，
更易消化 (2). 为细菌生长提供无机盐，作缓冲剂维持细菌生长过程中 pH 的稳定 (3).
不能、因为要筛选出能高效降解蛋白质的细菌，配制培养液时必须以蛋白质为唯一碳源，所
以不能把蛋白质换成葡萄糖 (4). 琼脂 (5). 稀释涂布平板法 (6). 选择培养基
(7). 提供有利于蛋白质降解菌生长的营养物质和条件，同时抑制或阻止其他种类微生物的生
长
【解析】
【分析】
常用的微生物的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法，分离和计数目的菌应使用加入琼
脂的固体培养基中，并制成平板，采用稀释涂布法进行接种。
【详解】（1）食用高温加热的牛奶更易消化，原因是高温使牛奶中蛋白质分子的空间结构变
得伸展、松散，易被蛋白酶水解，更易消化。
（2）该配方中，K2HPO4 和 KH2PO4 是一对缓冲物质，在溶液中以离子形成存在，其作用是
为细菌生长提供无机盐，作为缓冲剂能维持细菌生长过程中 pH 的稳定。该细菌能降解蛋口
质，要筛选出能高效降解蛋口质的细菌的选择培养液必须以蛋白质为唯一碳源，因此不能将
该配方中的蛋白质换成葡萄糖。
（3）固体培养基可以用于目的菌株的分离和计数，上述培养液为液体状态，需加凝固剂-
琼脂配制成固体培养基。稀释涂布平板法可用于分离和计数，因此接种时使用稀释涂布平板
法。
（4）从功能上看，上述所用培养基能筛选出高效降解蛋口质的细菌，培养基属于选择培养
基。其作用原理是培养液中只提供有利于蛋白质降解菌生长的营养物质和条件，同时抑制或
阻止其他种类微生物的生长。
【点睛】考查学生对微生物的实验室培养和应用的掌握，要求学生能应用相关知识解决实际
问题。
（黑龙江省佳木斯市一中 2020-2021 学年高三第六次调研考试生物试题）14. 回答下列有关
泡菜制作的习题：
（1）制作泡菜是，所用盐水煮沸，其目的是___________________。为了缩短制作时间，有
人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的目的是____________。
（2）泡菜制作过程中，乳酸发酵过程即为乳酸菌进行________的过程。该过程发生在乳酸
菌的
___________中。
（3）泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有________、_________和________等。
（4）从开始制作到泡菜质量最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸
菌和其他杂菌的消长规律是_______________，原因是：_______________________。
【答案】 (1). 消毒杀菌 (2). “陈泡菜水”含乳酸菌，为泡菜发酵提供菌种 (3). 无
氧呼吸 (4). 细胞质基质 (5). 温度 (6). 食盐用量 (7). 腌制时间 (8). 乳
酸菌先增加后减少，其他杂菌逐渐减少 (9). 泡菜的制作过程中，许多乳酸菌产生大量乳
酸，共同抑制其它菌的生长，乳酸积累过多，又会抑制乳酸菌自身的生长
【解析】
【分析】
本题是考查泡菜制作的原理和和影响亚硝酸盐含量的因素，回忆泡菜制作的原理、过程和影
响亚硝酸盐含量的因素，然后根据问题的具体要求进行解答。
【详解】（1）泡菜制作的原理是乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，在制作泡菜时所配制的泡菜盐水，
要煮沸，杀灭盐水中的微生物，防止杂菌污染，由于陈泡菜水中含有乳酸菌，在盐水中加入
陈泡菜水的目的是加进乳酸菌的菌种，使乳酸菌的种群数量快速增加。
（2）泡菜中乳酸的发酵过程既是乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸的过程，乳酸菌的无氧呼吸
的场所是细胞质。
（3）发酵温度、食盐的用量、腌制时间等会影响泡菜中亚硝酸盐的含量。
（4）泡菜制作过程中，由于乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸，泡菜液逐渐变酸，随乳酸菌的
数量增加，泡菜液的酸性增强，不耐酸的杂菌数量逐渐减少。
（江苏省扬州市 2020-2021 学年高三 1 月适应性练习生物试题） 乳链菌肽是由乳酸乳球菌
分泌的一种由 34 个氨基酸组成的小肽，对许多革兰氏阳性菌，尤其是对引起食品腐败的细
菌具有强烈的抑制作用，是一种高效无毒的天然食品防腐剂。研究人员从新鲜牛奶中获得多
株产乳链菌肽的菌株，进行了如下实验：
（1）筛选菌株：
将含有杀菌物质的滤纸片放到滴有细菌培养液的固体培养基上，经过培养，杀菌物质杀死细
菌后会在滤纸片周围形成抑菌圈。将革兰氏阳性菌涂布于平板上，将灭菌的大小相同的滤纸
片均匀地摆放在培养基表面，在其上分别滴加等量备选菌株培养液的上清液，对比观察
________，选取抑制作用最强的菌株。
（2）纯化菌株：
A 过程配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持_______。
B 过程常用的方法是_______。D 过程与 C 过程相比，培养基中增加的物质是_______。E 过
程需将纯化的菌株接种于_____培养基中 4℃保存。
（3）为了解乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式是抑制细菌生长、溶菌性杀死细菌（细胞
破裂）还是非溶菌性杀死细菌，科研人员将乳链菌肽加入革兰氏阳性菌菌液中，随着发酵时
间的延长，检测革兰氏阳性菌的活菌数、除去菌体的上清液中核酸含量，实验结果如下图所
示。
对革兰氏阳性菌活菌的计数方法为_______。以上实验表明乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用
方式为______，理由是______；_____。
（4）研究表明乳酸乳球菌不仅有合成乳链菌肽的编码基因，还有相关的免疫基因以确保分
泌的乳链菌肽对自身细胞并不会产生伤害，其中可以用作基因工程中的标记基因的是
________。
（5）乳链菌肽作为天然防腐剂，但不会改变人体肠道中的正常菌群，也不会进入内环境，
推测可能的原因是_______。
【答案】 (1). 抑菌圈的大小 (2). 渗透压 (3). 高压蒸汽灭菌法 (4). 琼脂
(5). 固体斜面 (6). 稀释涂布平板法 (7). 非溶菌性杀死细菌 (8). 曲线 3 活菌数降
为零，说明是杀死细菌； (9). 除去菌体的上清液中核酸含量没有明显变化，说明不是溶
菌 (10). 免疫基因 (11). 可能被消化道中蛋白酶所降解
【解析】
【分析】
1、微生物常见的接种的方法（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，
接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，
菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀
释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、实验室中微生物的筛选的原理：是人为提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻
止其他微生物生长，用于筛选目的菌株的培养基称为选择培养基。
【详解】（1）由于含有杀菌物质的滤纸片放到滴有细菌培养液的固体培养基上，经过培养，
杀菌物质杀死细菌后会在滤纸片周围形成抑菌圈。抑菌圈越大说明杀菌物质的杀菌能力越
大。所以将革兰氏阳性菌涂布于平板上，将灭菌的大小相同的滤纸片均匀地摆放在培养基表
面，在其上分别滴加等量备选菌株培养液的上清液，对比观察抑菌圈的大小，选取抑制作用
最强的菌株。
（2）A 过程配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持渗透
压，制备培养基时，应该先调 pH 再灭菌。B 过程常用的方法是高压蒸汽灭菌法。这是培养
基灭菌常用的方法。D 过程所需的是固体培养基，而 C 过程所需的是液体培养基，因此 D
过程培养基中增加的物质是凝固剂--琼脂。E 过程需将纯化的菌株接种于固体斜面培养基中
4℃保存。这是菌种临时保存的常用方法。
（3）为了解乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式究竟是抑制细菌生长、溶菌性杀死细菌（细
胞破裂）、非溶菌性杀死细菌，实验组为加入乳链菌肽的革兰氏阳性菌菌液，对照组为加入
等量灭活乳链菌肽的革兰氏阳性菌菌液，对革兰氏阳性菌活菌的计数方法为稀释涂布平板
法，由图可知，对照组的种群数量变化呈 S 型。由于曲线 3 活菌数降为零，说明是非溶菌
性杀死细菌；除去菌体的上清液中核酸含量没有明显变化，说明不是溶菌。
（4）研究表明乳酸乳球菌不仅有合成乳链菌肽的编码基因，还有相关的免疫基因以确保分
泌的乳链菌肽对自身细胞并不会产生伤害，其中可以用作基因工程中的标记基因的是免疫基
因，因为有免疫基因就可抗乳链菌肽，用于目的基因的筛选。
（5）乳链菌肽作为天然防腐剂，它是由 34 个氨基酸组成的多肽，使用乳酸菌链球菌防腐的
优点是不会改变人体肠道内正常菌群，也不会进入内环境。推测可能的原因是是食用后可能
被消化道中蛋白酶所降解而被被人体消化。
【点睛】本题考查微生物的分离和培养，解题关键是识记培养基的制备过程，掌握接种微生
物常用的方法，能结合图中信息答题。
（江苏省扬州市 2020-2021 学年高三 1 月适应性练习生物试题）下列有关传统发酵技术及其
应用的叙述，正确的是（ ）
A. 制作的葡萄酒酸味较重，是由于发酵温度过低造成的
B. 制作果醋时，在液体培养基的表面将会形成单菌落
C. 制作泡菜时，坛盖边缘水槽需保持有水以保证坛中无氧环境
D. 为防止污染，榨汁机和发酵瓶在使用前都必须严格灭菌
【答案】C
【解析】
【分析】
1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型．果酒制作的原理：
（1）在有氧条件下，反应式如下：C6H12O6+6H2O+6O2
酶
6CO2+12H2O+能量；
（2）在无氧条件下，反应式如下：C6H12O6
酶
2CO2+2C2H5OH+能量。
2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型．果醋制作的原理：
当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。
当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【详解】A、制作的葡萄酒酸味较重，是由于发酵温度变高，醋酸菌发酵造成的，A 错误；
B.、制作果醋时，在液体培养基的表面将会形成菌膜，不会形成单菌落，B 错误；
C、乳酸菌是厌氧生物，故制作泡菜时，坛盖边缘水槽需保持有水以保证坛中无氧环境，C
正确；
D、为防止污染，榨汁机和发酵瓶在使用前都必须严格消毒，D 错误。
故选 C。
（江苏省泰州市 2020-2021 学年高三上学期期末调研测试生物试题） 细菌生物膜是指细菌
粘附于接触表面，分泌多糖基质、纤维蛋白等黏质，将其自身包绕其中而形成的大量细菌聚
集膜样物。为评估鱼腥草素钠、红霉素对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响，研究者设置不同
组合，将预先灭菌的盖玻片浸在适宜的菌液培养基中，使之形成生物膜，然后再分别置于 4
种加药或不加药的培养基中培养。3 天后观察并记录结果见下表。下列说法正确的是（ ）
组
别
药物组合及浓度 3 天后观察的实验结果
1 不加药 盖玻片表面形成了厚厚的生物膜
2 1/4 MIC 红霉素
密集的生物膜被显著破坏，细菌数量较多，细胞间
存在少量黏质
3 1/4 MIC 鱼腥草素钠
生物膜破坏严重，只剩下分散的细菌，细胞间黏质
不易见
4
1/16 MIC 鱼腥草素钠+1/4 MIC
红霉素
生物膜破坏严重，细菌数量最少，细胞间无黏质
注：MIC 指最小抑菌浓度
A. 表皮葡萄球菌生物膜的基本支架是双层磷脂分子
B. 盖玻片作为玻璃制品最适宜的灭菌方法是高温灼烧
C. 盖玻片所浸的菌液培养基制备时要添加琼脂使之凝固
D. 鱼腥草素钠和红霉素联合使用为药物减量增效提供选择
【答案】D
【解析】
【分析】
1、生物膜系统是指由细胞膜、核膜以及内质网、高尔基体、线粒体等膜形成的。
2、灭菌是指在强烈的理化因素条件下，杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。
3、灭菌的常用方法
（1）灼烧灭菌法，例如：接种工具
（2）干热灭菌法，例如：玻璃器皿、金属用具
（3）高压蒸汽灭菌法，例如：培养基及容器
【详解】A、由题干“细菌生物膜是指细菌粘附于接触表面，分泌多糖基质、纤维蛋白等黏
质，将其自身包绕其中而形成的大量细菌聚集膜样物”可知，与真核生物的生物膜不同，表
皮葡萄球菌生物膜并不是双层磷脂分子，A 错误；
B、盖玻片作为玻璃制品，最适宜的灭菌方法是干热灭菌法，B 错误；
C、盖玻片所浸的菌液应采用半固体或液体，不能加过多琼脂使之凝固，C 错误；
D、通过比较 1-4 组的 3 天后观察的实验结果表明：鱼腥草素钠和红霉素联合使用为药物减
量增效提供选择，D 正确。
故选 D。
（江苏省泰州市 2020-2021 学年高三上学期期末调研测试生物试题）研究小组利用稀释涂布
平板法来估测大肠杆菌的数量，每一个浓度涂布四个平板。下列关于操作步骤的叙述正确的
是（ ）
A. 因为实验前后形成对照，因此本实验不必设置空白对照组
B. 涂布前将沾有少量酒精的涂布器引燃，待涂布器冷却后再涂布
C. 为避免混淆应在培养皿的皿盖上做标记，并将培养皿倒置培养
D. 用此法估测的数值往往偏小，故应以菌落数最多平板计数为准
【答案】B
【解析】
【分析】
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成
这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成
均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在，再取一定稀释
度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个
细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
【详解】A、需要一个空白的牛肉膏蛋白胨培养基做对照，可以判断出是否被杂菌污染，A
错误；
B、涂布器灭菌时，将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后，冷却 8～10s 再
用，B 正确；
C、用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底。因为如果把标签写在盖子上，培养皿倒
置后标签就看不到了，C 错误；
D、当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往
比活菌的实际数目少。一般选择菌落数在 30～300 的平板进行计数，密度过大会使计数结果
偏小，影响结果的准确性，D 错误。
故选 B。
（江苏省南通市如皋市 2020-2021 学年高三上学期期末生物试题）豆浆是人们喜爱的早餐饮
品之一，但它易变质，保质期较短。科研人员对变质豆浆中的腐败细菌进行分离，关于分离
过程的叙述，正确的是（ ）
A. 在培养基中加入抗生素，以便防止杂菌污染
B. 配制培养基时，先调节 pH，再进行灭菌
C. 可采用划线法或稀释涂布平板法进行接种
D. 培养基的配置和接种都必须在酒精灯火焰旁进行
【答案】BC
【解析】
【分析】微生物实验室培养的实验操作：
1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：其基本过程为计算、称量、溶化、调 pH、灭菌、倒平板
五个步骤。
2．纯化大肠杆菌：
（1）原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个单个菌
落就是一个纯化的细菌菌落。
（2）微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，
接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，
菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释
后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、抗生素具有杀菌作用，专一针对细菌起作用，本实验要分离变质豆浆中的腐败
细菌，抗生素也对它起作用，不能达到分离效果，A 错误；
B、配置培养基时要调 pH，再灭菌，否则灭菌后再调 pH 时造成杂菌污染，微生物操作的核
心是防止杂菌污染，B 正确；
C、微生物接种方法很多，常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，C 正确；
D、培养基配置好之后还需要高压蒸汽灭菌，因此可以不用在酒精灯火焰旁进行，D 错误。
故选 BC。
（江苏省南通市如皋市 2020-2021 学年高三上学期期末生物试题）为了提取棉花叶绿体
DNA，研究人员的下列做法，正确的是（ ）
A. 选取叶肉细胞作为提取叶绿体 DNA 的实验材料
B. 将细胞置于蒸馏水中，可以使细胞吸水胀破释放叶绿体
C. 采用差速离心法去除细胞壁、核物质时，转速小于获得叶绿体的转速
D. 整个实验过程置于低温条件下，可以防止 DNA 的降解
【答案】ACD
【解析】
【分析】差速离心主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。起始的离心
速度较低，让较大的颗粒沉降到管底，小的颗粒仍然悬浮在上清液中。收集沉淀，改用较高
的离心速度离心悬浮液，将较小的颗粒沉降，以此类推，达到分离不同大小颗粒的目的。
【详解】A、提取叶绿体 DNA 的材料要求是含叶绿体，叶肉细胞含有大量的叶绿体，所以
可以选取叶肉细胞提取叶绿体 DNA，A 正确；
B、含叶绿体的细胞一般是植物细胞，植物细胞含有细胞壁，起到支持和保护作用，植物细
胞不会因为吸水而涨破，B 错误；
C、分离细胞中各种细胞结构时采用的是差速离心法，起始离心速度低，后改用较高的离心
速度，细胞壁、核物质比叶绿体先分离出来，所以转速较小，C 正确；
D、低温下，酶活性较低，DNA 很难被降解，D 正确。
故选 ACD。
（江苏省连云港市 2020-2021 学年高三 1 月适应性演练模拟生物试题）菌落总数可作为判定
食品被污染程度的标志，也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对送检样品进行卫
生学评估提供证据。下图是某样品培养简化流程图，请分析回答下列问题：
（1）该营养琼脂培养基配制过程中，其基本步骤包括按照培养基配方准确计算、称量、溶
化、调节 pH、______________法灭菌等。然后将培养基放入 47 ℃水浴锅保温，选择此温度
的理由是_______________________。
（2）实验过程中须将样品剪碎并使用均质器 10000 r·min-1 处理 1 min，其目的是
________________。从水浴锅取出营养琼脂培养基倒平板适量，稍冷却后移液 0．2mL 样品
于培养皿进行涂布，涂布时可_____________，使涂布更均匀。
（3）本实验用菌落计数的原理是基于_______________________________，运用这种方法统
计的结果往往较实际值偏_______。具体培养结果如下表。选取菌落数 30～300 的培养皿作
为菌落总数的测定标准。当只有一个稀释梯度的平均菌落数符合此范围，以该培养皿菌落数
×稀释倍数报告。当有两个梯度菌落值在 30～300 之间，报告结果由二者菌落数比值决定，
若比值不大于 2，则取平均数，且菌落数大于 100 取两位有效数字，两位之后的数值四舍五
入；若比值大于 2，则报告稀释度较低（稀释次数越多，稀释度越高）的培养皿菌落数。请
填写例次 3 中“?”处的菌落总数为__________。
例次
不同稀释度平均菌落数 两稀释度菌
落数之比
菌落总数
/[CFU/mL（g）]10-1 10-2 10-3
1 1365 164 20 — 16400
2 2760 295 46 1．6 38000
3 2890 271 60 2．2 ?
（4）利用鲜奶进行工业生产酸奶时，不能使用____________污染的鲜奶为原料，否则会使
乳酸菌生长受到限制；利用___________法可以除去鲜奶中的白细胞、杂菌和其他肉眼可见
的异物，取其上清液用于发酵制酸奶。
（5）密封良好的泡菜坛内有时会长一层白膜，这些白膜是_____________（选填“乳酸菌”
或“酵母菌”）繁殖产生的。在泡菜腌制过程中坛、蔬菜等均未进行严格灭菌，而在发酵过程
中一般不会出现其他杂菌大量繁殖，其原因是__________。
①发酵的原料中缺乏杂菌生长需要的各种营养物质
②发酵过程的温度不适合杂菌的生长
③乳酸菌产生较多乳酸，许多需氧菌被杀死
④在自然界中乳酸菌占优势
【答案】 (1). 高压蒸汽灭菌 (2). 保证培养基处于溶化状态（在凝固之前接种且不致
将培养物烫死） (3). 尽量使样品中的微生物细胞分散 (4). 转动培养皿 (5). 一个
菌落代表一个活菌 (6). 小 (7). 27100 (8). 抗生素 (9). 离心 (10). 酵母菌
(11). ③
【解析】
【分析】
1、各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对 pH、特殊
营养物质以及温度的要求。根据培养基中是否含有琼脂，即琼脂的多少可以将培养基分为固
体培养基、液体培养基和半固体培养基。制备固体培养基的方法：计算、称量、溶化、灭菌、
倒平板；
2、工业生产酸奶时，不能用含有抗生素的鲜奶为原料，含有的抗生素会抑制乳酸菌的生长
从而使酸奶的发酵失败；
3、密封的泡菜坛因为乳酸菌产生的酸性及厌氧环境不利于其他杂菌的生长。
【详解】（1）配制培养基时应按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培
养基的 pH，并进行高压蒸汽灭菌；然后将培养基放入 47 ℃水浴锅保温，用手触摸不烫手以
便于操作，并能保证培养基处于溶化状态，且在凝固之前接种不致将培养物烫死。
（2） 实验过程中要将样品剪碎并使用均质器 10000 r·min-1 处理 1 min，尽量使样品中的微
生物细胞分散；为了使涂布更均匀，涂布时可转动培养皿；
（3）根据题意可知，例次 3 应选取 10-2 的菌落数报告，则 3 菌落总数为 271×100=27100；
（4）抗生素污染会使乳酸菌生长受到限制，因此不能使用抗生素污染的鲜奶为原料生产酸
奶，原料乳中可能含有细胞类物质(如上皮细胞的白细胞等) ， 其中一些是牛乳中固有的，
也有一些是挤奶过程中牛乳受污染而带进牛奶的 ，为了保证产品获得良好的最终质量，酸
乳制作中第一步就是要除去这些污染物质 ，常利用特别设计的离心机进行离心除去牛乳中
的白细胞和其他肉眼可见的异物；
（5）泡菜发酵利用的菌种是乳酸菌，在发酵过程中，乳酸菌产生的酸性及厌氧环境不利于
其他杂菌的生长，所以发酵过程中一般不用严格灭菌，泡菜坛内表面会长出一层白膜，这些
白膜是酵母菌繁殖产生的。
【点睛】本题旨在考查微生物的分离和培养、某种微生物数量的测定，意在考查具备验证简
单生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行处理和报告，具有对一些生物学问题进行
初步探究的能力。
（江苏省常州市、溧阳中学 2020-2021 学年高三上学期期末联合考试生物试
题）微生物与人类的生产、生活密切相关，为了更好地利用它们为人类服务，研究人员利用
多种生物学技术对获得的大肠杆菌进行改造：将某微生物的固碳基因导入其细胞内，使之能
产生用于 CO2 固定和还原的酶，同时还关闭了三个参与异养代谢相关酶的基因；将能利用
甲酸盐（可再生的储氢物质，具备廉价、易得、无毒、可降解等特性）合成 ATP 的非天然
酶基因导入大肠杆菌，使其能利用甲酸盐合成生命活动所需的 ATP。如图 1 所示。
（1）为了获得大肠杆菌，首先在富含大肠杆菌的土壤中采集、稀释并置于液体培养基中培
养，若锥形瓶中大肠杆菌细胞密度为 3×107 个/mL，在通过___________法进行纯化、计数时，
至少需将培养液中的菌液稀释___________倍才能进行接种。
（2）对大肠杆菌进行改造的过程中，构建表达载体时不应选用大肠杆菌自身具备的基因作
为标记基因，是为了便于筛选___________的大肠杆菌。根据图 1 推测改造后的大肠杆菌合
成有机物的碳来自___________，不仅其碳源的来源进行了调整，它的___________来源也进
行了改造。请写出以上操作中涉及到的相关生物学技术___________（答两项）。
（3）改造后的大肠杆菌并没有全部按设想的代谢方式生活，还需对其进行___________以获
得符合预期的目的菌，此过程中除水、无机盐、氮源外，还加入数量有限的糖类、一定浓度
的___________，同时通入 CO2 浓度为 10%的无菌空气；每天取 2mL 培养基检测成分变化
及目的菌的数量等，当菌体数量达到一个稳定值后，更换培养基，结果如图 2。在对培养基
成分分析时发现，第 47、166、214 和 343 天，培养基中的糖含量不断下降直至降为零。据
数据分析，选择在第___________天左右得到大肠杆菌是更符合生产要求的工程菌。
（4）请评价将最终获得的大肠杆菌用于生物燃料生产的可行性，并说明理由___________。
【答案】 (1). 稀释涂布平板法 (2). 104 (3). 导入重组质粒 (4). 二氧化碳
（CO2） (5). 能量 (6). 蛋白质工程、基因工程、基因编辑、微生物培养 (7). 筛
选 (8). 甲酸盐 (9). 343 (10). 不可以。虽然获得的大肠杆菌能利用甲酸盐和二氧
化碳获得有机物，但实验中二氧化碳浓度达到 10%，而在自然条件下难以达到，不能存活；
大肠杆菌固定二氧化碳的量少于甲酸盐分解产生二氧化碳的量，可能对环境造成影响。
可以。获得的大肠杆菌可以将甲酸盐和二氧化碳转化为乙醇等生物燃料，成本较低
【解析】
【分析】
1、纯化大肠杆菌的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，计数常用稀释涂布平板
法。
2、培养微生物的培养基化学成分包括 水 、 无机盐 、 碳源 、 氮源，培养基还要满足微
生物生长对 PH、特殊营养物质以及氧气的要求。
3、基因工程的基本操作步骤：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因
导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。其中，基因表达载体的构建是基因工程的核心。
【详解】（1）为了获得大肠杆菌，通过稀释涂布平板法法进行纯化、计数。锥形瓶中大肠杆
菌细胞密度为 3×107 个/mL，由于样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目，实际操作
中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落在 30～300 之间、适于计数
的平板，测定土壤中细菌的数量，至少选用 104 倍的稀释液进行平板培养才能进行接种。
（2）对大肠杆菌进行改造的过程中，构建表达载体时不应选用大肠杆菌自身具备的基因作
为标记基因，是为了便于筛选导入重组质粒的大肠杆菌。据图 1 可知，有 CO2 指向大肠杆
菌内部，故可推测改造后的工程菌合成有机物的碳来自二氧化碳。对比改造前后的图并结合
题干信息可知，除调整大肠杆菌碳源的来源，还对其能量来源进行了改造。以上操作中涉及
到的相关生物学技术有蛋白质工程、基因工程、基因编辑、微生物培养。
（3）为获得目的菌，研究人员需对改造后的工程菌进行筛选。因目的菌应能利用甲酸盐，
故筛选时培养基中除有必须的碳源、氮源、水和无机盐之外，还应加入甲酸盐；通过图 2
的实验结果可知，在第 47、166、214 和 343 天，培养基中的糖含量一直在下降直至为零，
在 343 天左右生物量较多且对外源糖碳的依赖量很低，故此时能得到较多符合要求的工程
菌。
（4）判断最终获得的大肠杆菌用于生物燃料生产的可行性，可从实验结果及实验条件方面
进行正反两方面分析：①不可以，虽然获得的大肠杆菌能利用甲酸盐和二氧化碳获得有机物，
但实验中二氧化碳浓度达到 10%，而在自然条件下难以达到，不能存活，大肠杆菌固定二
氧化碳的量少于甲酸盐分解产生二氧化碳的量，可能对环境造成影响。②可以，获得的大肠
杆菌可以将甲酸盐和二氧化碳转化为乙醇等生物燃料，成本较低。
【点睛】本题利用大肠杆菌细胞，考查了微生物的培养、纯化、计数、蛋白质工程、基因工
程、基因编辑等知识，要求学生有较强的基础知识积累并能灵活运用。
（江苏省常州市、溧阳中学 2020-2021 学年高三上学期期末联合考试生物试
题）棉叶总 DNA 的提取较为困难，若采集的鲜叶样品保存不当，将严重影响其 DNA 的提
取率及纯度。科研人员以棉花新鲜嫩叶为对照，比较了不同贮藏条件（4℃冷鲜保存 3d、-20℃
冷冻保存 3d 和 7d）对棉叶 DNA 提取率及纯度的影响，结果如下图。相关叙述正确是（ ）
A. 利用不同浓度的 NaCl 溶液可初步去除部分杂质
B. 鲜叶提取的 DNA 与二苯胺试剂反应呈现的蓝色最深
C. 冷冻保存 7d 后提取的 DNA 中有些蛋白质或氨基酸未除尽
D. 冷冻保存 3d 组的 DNA 提取效果优于冷鲜保存 3d 组
【答案】ACD
【解析】
【分析】
1、DNA 粗提取和鉴定的原理（1）DNA 的溶解性：DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度
Nacl 溶液中溶解度不同；DNA 不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA 对
酶、高温和洗涤剂的耐受性。（2）DNA 的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA 遇二苯胺会被染
成蓝色。
2、DNA 粗提取和鉴定的过程
（1）实验材料的选取：凡是含有 DNA 的生物材料都可以考虑，但是使用 DNA 含量相对较
高的生物组织，成功的可能性更大。
（2）破碎细胞，获取含 DNA 的滤液：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡
血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料
是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。
（3）去除滤液中的杂质：方案一的原理是 DNA 在不同浓度 NaCl 溶液中溶解度不同；方案
二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解 DNA；方案三的原理是蛋白质和 D NA 的变性温度
不同。方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的 DNA 与蛋白质分开；方案三利用
的是 DNA 和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与 DNA 分离。
（4）DNA 的析出与鉴定①将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，
静置 2~3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的 DNA.用玻璃棒沿一个方向搅拌，
卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。②取两支 20ml 的试管，各加入物质的量浓度为
2mol/L 的 NaCl 溶液 5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，便丝状物溶解。
然后，向两支试管中各加入 4ml 的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5min，
待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有 DNA 的溶液是否变蓝。
【详解】A、DNA 在不同浓度 NaCl 溶液中溶解度不同，利用不同浓度的 NaCl 溶液可初步
去除部分杂质，A 正确；
B、新鲜棉叶提取的 DNA 纯度最高，但提取率不高，因此新鲜棉叶提取 DNA 的量不是最多
的，与二苯胺试剂反应呈现的蓝色也不是最深，B 错误；
C、由图示可知，冷冻保存 7d 后提取的 DNA 纯度 OD260/OD280 小于 1.8，说明有些蛋白质或
氨基酸未除尽，C 正确；
D、由图示结果可知，冷冻保存 3d 组的 DNA 提取率大于冷鲜保存 3d 组，D 正确。
故选 ACD。（江苏省常州市、溧阳中学 2020-2021 学年高三上学期期末联合考
试生物试题）酿制果酒时常需要在培养基中添加一定浓度的葡萄糖液，若葡萄糖浓度过高会
抑制酵母菌的生长，其原因最可能是（ ）
A. 酵母菌细胞呼吸加快，产热增多，抑制酶的活性
B. 培养基的渗透压增大，导致酵母菌细胞失水
C. 葡萄糖分解为丙酮酸，改变了培养液的 pH 值
D. 醋酸菌大量繁殖，抑制了酵母菌的繁殖
【答案】B
【解析】
【分析】
酿制果酒需要酵母菌，它无氧呼吸时，进行酒精发酵，产生酒精，添加适宜浓度的葡萄糖可
以作为酵母菌的能源物质。
【详解】A、葡萄糖浓度过高不会加快酵母菌的呼吸速率，呼吸速率受多种因素的影响，A
错误；
B、葡萄糖浓度过高后，使培养基的渗透压增大，导致酵母菌细胞失水，生命活动受到抑制，
B 正确；
C、在进行呼吸作用时，葡萄糖会分解为丙酮酸，但丙酮酸只是中间产物，丙酮酸会被继续
分解或者转化为乙醇和二氧化碳，所以丙酮酸不会改变培养液的 pH 值，C 错误；
D、醋酸菌为需氧型细菌，在酒精发酵过程中，是缺氧环境，醋酸菌不会大量繁殖，D 错误。
故选 B。
（江苏省 G4（、、、常州中学）2020-2021 学年高三上学期期
末调研生物试题）某生物兴趣小组完成了“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”的实验，具
体操作流程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 在酒精灯火焰附近称取土壤并将其倒入锥形瓶中
B. 梯度稀释时可用移液管或微量移液器进行操作
C. 振荡的目的是为了增加尿素分解菌的浓度
D. 由图示菌落计数结果可知 10 克土样中的菌株数约为 1．6×107 个
【答案】ABD
【解析】
【分析】
分析图示：称取 10g 土样倒入 90mL 无菌水中，土样中分解尿素的细菌已被稀释了 10 倍，
取 0.5mL 土壤悬浮液倒入 4.5mL 无菌水中，分解尿素的细菌被稀释了 10 倍，至此分解尿素
的细菌被稀释了 100 倍，同理整个流程结束后分解尿素的细菌被稀释了 104 倍，取 0.1mL 稀
释液涂布在平板上，最后平板上得到的菌落数为 16 个。即每克土壤中的菌株数为
16÷0.1×104=1.6×106 个。
【详解】A、酒精灯火焰附近存在一个无菌区，在酒精灯火焰附近称取土壤并将其倒入锥形
瓶中，可以防止称取的土壤在倒入锥形瓶过程中，土样被污染，A 正确；
B、只用移液管，分度太低，而只用微量移液器，容量又太小，所以梯度稀释时可用移液管
或微量移液器进行操作，B 正确；
C、振荡培养的目的是提高培养液的溶解氧的含量，使菌体充分接触培养液，提高营养物质
的利用率，C 错误；
D、由分析可知，每克土壤中的菌株数为 1.6×106，即 10 克土样中的菌株数约为 1.6×107 个，
D 正确。
故选 ABD。
（江苏省 G4（、、、常州中学）2020-2021 学年高三上学期期
末调研生物试题）下列有关利用传统发酵技术制作果酒、果醋及泡菜的叙述，正确的是（ ）
A. 发酵原料和发酵装置都需进行灭菌，以防止杂菌污染
B. 发酵用菌种的细胞呼吸类型及生物膜系统的组成都是相同的
C. 三者的发酵液都主要是因为产生了大量二氧化碳而呈酸性
D. 制作泡菜时加入一定量的陈泡菜汁能加快发酵进程
【答案】D
【解析】
【分析】
1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。
2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。
3、泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌，乳酸菌的代谢类型为厌氧型细菌，在
无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。
【详解】A、果酒、果醋及泡菜的制作过程中的产物（酒精、醋酸形成的酸性条件、乳酸形
成的酸性条件）能抑制杂菌的繁殖，而且传统发酵技术制作过程中的菌种一般来源于原料中，
因此发酵原料不需要灭菌，否则会杀死菌种，A 错误；
B、由分析可知，发酵用菌种的细胞呼吸类型不相同，发酵菌种有酵母菌真菌，也有醋酸菌、
乳酸菌细菌，真菌有生物膜系统，细菌只有生物膜（细胞膜），B 错误；
C、泡菜呈酸性是因为乳酸菌进行无氧呼吸产生了乳酸，果醋呈酸性是因为醋酸菌进行有氧
呼吸产生了醋酸，果酒呈酸性因为酵母菌呼吸作用产生了二氧化碳溶于水，C 错误；
D、制作泡菜时加入一定量的陈泡菜汁，能增加乳酸菌菌种的数量，可以加快发酵进程，D
正确。
故选 D。（2021 届江苏省宿迁市沭阳县修远中学高三上学期教学质量调研（三））菌落总数
可作为判定食品被污染程度的标志，也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对送检
样品进行卫生学评估提供证据。下图是某样品培养简化流程图，请分析回答下列问题：
（1）该营养琼脂培养基配制过程中，其基本步骤包括按照培养基配方准确计算、称量、溶
化、调节 pH、___________________法灭菌等。
（2）实验过程中须将样品剪碎并使用均质器 10 000 r·min-1 处理 1 min，其目的是
___________。
样品稀释时取 1mL 原液加入__________中，稀释 10 倍。涂布器一般是在酒精中浸泡，然后
酒精火焰上引燃灭菌，不用灼烧灭菌的原因_________________________________________。
（3）本实验用菌落计数的原理是基于______________________，运用这种方法统计的结果
往往较实际值偏________，原因是________________________________________________。
通常对获得的纯菌种可以依据菌落的_____________________等菌落特征对微生物进行初步
鉴定（或分类）。
（4）用菌落计数的具体培养结果如下表。选取菌落数 30~300 的培养皿作为菌落总数的测定
标准。当只有一个稀释梯度的平均菌落数符合此范围，以该培养皿菌落数×稀释倍数报告。
当有两个梯度菌落值在 30~300 之间，报告结果由二者菌落数比值决定，若比值不大于 2，
则取平均数；若比值大于 2，则报告稀释度较低（稀释次数越多，稀释度越高）的培养皿菌
落数。请填写例次 2、3 中“？”处的菌落总数分别为_____________、_____________。
例次
不同稀释度平均菌落数 两稀释度菌
落数之比
菌落总数
/\[CFU/mL（g）\]10-1 10-2 10-3
1 1 365 164 20 — 16 400
2 2 760 295 46 1.6 ？
3 2 890 271 60 2.2 ？
【答案】 (1). 高压蒸汽灭菌法 (2). 尽量使样品中的微生物细胞分散 (3). 9ml 无
菌水（蒸馏水不对） (4). 玻璃涂布器灼烧后不易降温 (5). 一个菌落代表一个活菌
(6). 小 (7). 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (8). 形
状、大小、颜色 、隆起程度 (9). 37750 (10). 27100
【解析】
【分析】
各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对 pH、特殊营
养物质以及温度的要求。根据培养基中是否含有琼脂，即琼脂的多少可以将培养基分为固体
培养基、液体培养基和半固体培养基。制备固体培养基的方法：计算、称量、溶化、灭菌、
倒平板。
【详解】（1）配制培养基时应按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培
养基的 pH，并进行高压蒸汽灭菌；然后将培养基放入 47 ℃水浴锅保温，用手触摸不烫手还
便于操作，并能保证培养基处于溶化状态，且在凝固之前接种不致将培养物烫死；
（2） 实验过程中要将样品剪碎并使用均质器 10 000 r·min-1 处理 1 min，尽量使样品中的微
生物细胞分散；将 1 mL 样品稀释 10 倍，需加入 9 mL 无菌水，玻璃涂布器灼烧后不易降温，
所以涂布器灭菌时，将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却 8~10 s
再用；
（3） 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个
活菌，因此一个菌落可代表一个活菌。但在培养过程中，可能是两个或多个活菌形成一个菌
落，因此运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小；通常对获得的纯菌种可以依据菌落的
形状、大小、颜色 、隆起程度等菌落特征对微生物进行初步鉴定；
（4）结合题干可知，报告菌落总数时，应选取菌落数 30～300 的培养皿作为菌落总数的测
定标准。当有两个梯度菌落值在 30～300 之间时，报告结果由二者菌落数比值决定，若比值
不大于 2，则取平均数；若比值大于 2，则报告稀释度较低的培养皿菌落数。因此例次 2 应
选择 10-2 和 10-3 的菌落数求平均，该培养皿菌落数为（29.5+46）÷2=37.75，故例次 2 的菌
落总数为该培养皿菌落数×稀释倍数，既 37.75×1000=37750，例次 3 应选取 10-2 的菌落数报
告，则 3 菌落总数为 271×100=27100。
【点睛】本题旨在考查微生物的分离和培养、某种微生物数量的测定，意在考查具备验证简
单生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行处理和报告，具有对一些生物学问题进行
初步探究的能力。
（2021 届江苏省徐州市邳州市运河中学等高三三校联考生物试题） 在制作泡菜并检测亚硝
酸盐含量的实验中，说法错误的是（ ）
A. 泡菜中亚硝酸盐，随着泡制时间的增加，亚硝酸盐含量先升高后降低最后趋于稳定
B. 配制溶液所用的提取剂为氯化镉和氯化钡溶液，使样品溶液变得无色透明的是氢氧化铝
乳液
C. 亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成玫瑰红色染料
D. 泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有腌制的温度、腌制的时间和食盐的用量等
【答案】C
【解析】
【分析】
制作泡菜的实验原理：
1、乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸。
2、利用乳酸菌制作泡菜的过程中会引起亚硝酸盐的含量的变化。（温度过高，食盐用量
不足 10%、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。一般在腌制 10 天
后，亚硝酸盐的含量开始下降。）
3、测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反
应后，与 N−1−萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与已知浓度的标准显色液目测比
较，估算泡菜中亚硝酸盐含量。
【详解】A、随着泡制时间的增加，泡菜中亚硝酸盐含量先升高后降低最后趋于稳定，A 正
确；
B、配制溶液所用的提取剂为氯化镉和氯化钡溶液，氢氧化铝乳液能吸附色素等杂质，使泡
菜液变澄清，即对滤液起到净化作用，故使样品溶液变得无色透明的是氢氧化铝乳液，B 正
确；
C、在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与 N−1−萘基乙二胺
盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，C 错误；
D、在泡菜的腌制过程中，要注意控制腌制的时间、温度和食盐的用量，温度过高，食盐用
量过低、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加，D 正确。
故选 C。
（2021 届江苏省徐州市邳州市运河中学等高三三校联考生物试题）下图所示为“DNA 的粗
提取与鉴定”实验的部分操作过程，有关分析不正确的是（ ）
A. 图①④中加入蒸馏水的目的相同
B. 图①中向鸡血细胞液内加入少许嫩肉粉有助于去除杂质
C. 图②操作的目的是纯化 DNA，去除溶于体积分数为 95%酒精中的杂质
D. 图③中物质的量浓度为 2 mol·L-1 的 NaCl 溶液能溶解黏稠物中的 DNA
【答案】A
【解析】
【分析】
1、DNA 的溶解性：
（1）DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同（0.14mol/L 溶解度最
低），利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使 DNA 充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，
以达到分离目的。
（2）DNA 不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将
DNA 与蛋白质进一步的分离。
2、DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但是对 DNA 没有影响。大多
数蛋白质不能忍受 60−80∘ C 的高温，而 DNA 在 80∘ C 以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞
膜，但对 DNA 没有影响。
3、DNA 的鉴定在沸水浴条件下，DNA 遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定
DNA 的试剂。
【详解】A、①中加蒸馏水是为了使血细胞吸水涨破，④中加入蒸馏水是为了降低氯化钠溶
液的浓度，使 DNA 析出，A 错误；
B、嫩肉粉中含有蛋白酶，能够水解蛋白质，因此图①中向鸡血细胞液内加入少许嫩肉粉有
助于去除杂质，B 正确；
C、DNA 不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，因此②操作的目的是纯
化 DNA，去除溶于 95%酒精中的杂质，C 正确；
D、图③中 2 mol·L-1 NaCl 溶液能溶解黏稠物中的 DNA，D 正确。
故选 A。
（2021 届江苏省宿迁市沭阳县修远中学高三上学期教学质量调研（三））布设于道路周边的
生物滞留池可截留雨水。某城市道路收集到的雨水含有高浓度污染物，其中的多环芳烃
（PAHs）会严重危害城市水环境。科研人员希望从当地土壤中筛选耐受菌，解决污染问题。
经检测发现，生物滯留池内 PAHs 中的芘含量相对较高。研究者尝试筛选能降解芘的菌种。
23. 筛选能降解芘的菌种基本操作步骤如下。请将下列“方框”内字母后面内容补充完整。
______
24. 从对照区域和生物滞留池中分别培养出占比较高的菌属，结果见图 1、图 2。在两个区
域中均能检测出的菌属有_________个，此结果能够说明滞留池土壤中_____出现了明显的变
化，推测___________（对照区域土壤、滞留池中土壤）物种多样性更大。
25. 在另一个筛选对芘具有耐受性的菌株的实验中，分离得到四个菌属中的菌株，其生长曲
线见图 3。研究人员欲从中选择一个构建工程菌。结合图 1、图 2 所示结果，你认为应选择
________________，理由是__________________________。
【答案】23. a 芘 b 灭菌 c 平板涂布法 d 酒精灯火焰
24. (1). 3 (2). 微生物种类及比例 (3). 对照区域土壤
25. (1). Pse (2). Pse 菌株在对照池和滞留池中均占比较大且对芘的耐受性较好
【解析】
【分析】
生物多样性是指生物圈内的所有的植物、动物和微生物（物种多样性），他们所拥有的全部
基因（遗传多样性，也称基因多样性）以及各种各样的生态系统（生态系统多样性），包括
基因（遗传）多样性、物种多样性和生态系统多样性三个层次。
【23 题详解】
a、该实验中，目的是筛选能降解芘的菌种，故需要配制以芘为唯一碳源的培养基；b、培养
皿和培养基需要经过高压蒸汽灭菌法进行灭菌；c、倒平板后，由于不需要挑出单菌落，故
可采用涂布平板法接种土壤浸出液；d、接种操作应在超净工作台中的酒精灯火焰附近进行。
【24 题详解】
①分析图 1、图 2 的结果可知，在两个区域中均能够检测出的菌属有 Tha、Pse、Com 三种；
②该结果说明，滞留池土壤中微生物的种类及比例出现了明显的变化；③由两图的相对丰度
可知，对照区域土壤的物种多样性更大。
【25 题详解】
由图 3 的生长曲线可知四种菌对芘的耐受性均表现较好，但结合图 1、2 可知，有且仅有 Pse
菌株在对照池和滞留池中均占比较大且对芘的耐受性较好，故研究人员需要选择 Pse 来构建
工程菌。
【点睛】本题考查微生物培养技术的相关知识点，同时考查生物多样性的理解与运用，要求
学生能够结合题干的关键信息并利用所学知识对问题进行解答。
（2021 届江苏省宿迁市沭阳县修远中学高三上学期教学质量调研（三））制备牛肉膏蛋白胨
固体培养基的过程中，关于倒平板的描述正确的是（ ）
A. 等培养基冷却至 40℃左右时，方可进行倒平板
B. 将灭过菌的培养皿放在桌面上，打开培养皿盖
C. 等待平板冷却 5～10s，将平板倒过来放置
D. 倒平板后无需将培养基进行高压蒸汽灭菌
【答案】D
【解析】
【分析】
倒平板操作的步骤：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，
左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰；用左手的拇指和食指将培养皿打开一
条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖；
等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上，这样可以防止皿盖上的
水分滴到培养基上造成培养基的污染。
【详解】A、等培养基冷却至 50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，防止杂菌污染，A 错
误；
B、用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不能打开皿盖，B 错误；
C、等待平板冷却 5～10 分钟，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上，C 错误；
D、倒平板后无需将培养基进行高压蒸汽灭菌，灭菌应在倒平板之前进行，D 正确。
故选 D。
（2021 届江苏省连云港市高三上学期第一次学情检测生物试题） 如图
为苹果酒的发酵装置示意图，下列叙述错误的是（ ）
A. 发酵过程中酒精的产生速率越来越快
B. 集气管中的气体是酵母菌无氧呼吸产生的 CO2
C. 发酵过程中酵母种群呈“J”型增长
D. 若发酵液表面出现菌膜，最可能原因是发酵瓶漏气
【答案】ABC
【解析】
【分析】
【详解】A、酵母菌首先进行有氧呼吸，而后进行无氧呼吸，发酵过程中由于营养物质的减
少、有害代谢产物的积累，pH 的改变，酒精的产生速率逐渐减慢，A 错误；
B、集气管中的气体是酵母菌有氧呼吸和无氧呼吸产生的 CO2，B 错误；
C、发酵过程中酵母种群呈“S”型增长，而后减少，C 错误；
D、若酵液表面出现菌膜，属于醋酸菌，需氧型微生物，可能是发酵瓶漏气引起的，D 正确。
故选 ABC。
21.（２０２１届高三上学期第二次考试） 橙子果肉可供食用或制作果酒或橙
汁等，橙子皮可用于提取精油。研究发现橙皮精油和乳酸菌素均有抑菌作用，乳酸菌素是由
乳酸菌合成的一种小分子蛋白质。回答下列相关问题：
（1）提取橙皮精油时，不适合采用蒸馏法，主要的原因是______________。
（2）制作橙汁时，为提高出汁率，可加入____________________酶。为了确定该酶的最适
温度，某同学测得相同时间内，在 35℃、40℃、45℃温度下，在保证橙汁出汁率相同的前
提下，所需酶量依次为 4mg、1mg、6mg。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________
（填“35”“40”或“45”）℃左右的温度设计后续实验，这样做的理由是______________。
（3）为比较橙皮精油和乳酸菌素对大肠杆菌的抑菌效果，某同学先利用_________法将大肠
杆菌的菌液接种到 1～6 号相同的培养基上，长成分布均匀的单菌落，再将等量的_______
试剂分别滴加在 1～3 号、4～6 号培养基的菌落上。如果橙皮精油的抑菌效果好于乳酸菌素，
则观察到的实验现象是_________________________。
【答案】 (1). 橙皮易焦糊 (2). 纤维素酶和果胶酶 (3). 40 (4). 三种温度下的
实验结果可知，40 ℃下酶的活力最大，所以要想测定该酶的最适温度，应围绕该温度设计
不同的温度梯度，进行后续实验 (5). 稀释涂布平板； (6). 橙皮精油和乳酸菌素；
(7). 滴加橙皮精油处的透明圈比滴加乳酸菌素的透明圈要大
【解析】
【分析】
1、植物芳香油的提取方法有蒸馏、压榨和萃取等，具体采用哪种方法要根据植物原料的特
点来决定。
2、果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层，使榨取果汁变得容易，而果胶分解
为可溶性的半乳糖醛酸，也使得浑浊的果汁变得澄清。
3、微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是通过
接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表
面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是
菌落。 稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别
涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物
将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。
【详解】（1）橙皮精油主要储藏在橙皮部分，由于橙皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会
发生部分水解，使用水中蒸馏法又会产生原料焦糊的问题，所以提取橙皮精油时，不适合采
用蒸馏法，一般采用压榨法。
（2）纤维素是植物细胞壁的重要组成成分，果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分
之一，它是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物，不溶于水，制作橙汁时，为提高出
汁率，可加入纤维素酶和果胶酶。为了确定该酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在
35℃、40℃、45℃温度下，在保证橙汁出汁率相同的前提下，所需酶量依次为 4mg、1mg、
6mg。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕 40（填“35”“40”或“45”）℃左右的温度设计
后续实验，这样做的理由是三种温度下的实验结果可知，40 ℃下酶的活力最大，所以要想
测定该酶的最适温度，应围绕该温度设计不同的温度梯度，进行后续实验。
（3）为比较橙皮精油和乳酸菌素对大肠杆菌的抑菌效果，若大肠杆菌菌液的接种方法是平
板划线法，在培养基表面不会长成均匀分布的单菌落，所以某同学先利用稀释涂布平板法将
大肠杆菌的菌液接种到 1～6 号相同的培养基上，长成分布均匀的单菌落，再将等量的橙皮
精油和乳酸菌素试剂分别滴加在 1～3 号、4～6 号培养基的菌落上。某物质的抑菌效果越好，
在它周围形成的透明圈越大，如果橙皮精油的抑菌效果好于乳酸菌素，则观察到的实验现象
是滴加橙皮精油处的透明圈比滴加乳酸菌素的透明圈要大。
【点睛】本题主要考查了植物芳香油的提取、提高果汁出汁率的措施、探究酶的最适温度的
实验方法以及微生物的接种和培养等相关知识，意在考查考生对基础知识的掌握和灵活运用
基础知识的能力。
11. （江西省吉安市省“重点中学五校协作体”2021 届高三第一次联考理综试卷）Ⅰ.学习了
传统发酵技术的应用后，小明尝试了自制葡萄酒和泡菜。请回答下列问题：
(1)泡菜发酵过程中，会产生多种酸，其中主要是_____，还有少量的亚硝酸盐。对亚硝酸盐
的测定可以用_____法，因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与 N－1－萘基乙二胺盐
酸盐结合形成_____色染料。
(2)自制葡萄酒中是否有酒精，可用_____试剂进行检测，检测原理是_____。酿制的苹果酒
没有酒味，只有浓烈的醋味，可能的原因是_____。
Ⅱ.小明的妈妈常在家里用一种面膜，下表是面膜的部分成分。请回答下列问题：
类型 成分(部分)
保湿剂 水、甘油、丁二醇、丙二醇
防腐剂 羟苯甲酯、山梨酸钾、脱氢乙酸钠
粘度调节剂 卡波姆
植物提取物 海藻提取物、银耳提取物、马齿苋提取物
舒缓成分 尿囊素、甘草提取物
pH 调节成分 氢氧化钠、氢氧化钾、氨基酸、乳酸
其他 香精、尿素、蚕丝胶蛋白
说明：羟苯甲酯是广谱抗菌物质，能抑制革兰氏阴性、阳性细菌，对酵母菌及霉菌有较强的
抑制作用。
有人说：“面膜等同于细菌培养基”。根据微生物培养的知识并结合该种面膜的组成成分来分
析，你认为此说法_____(填“合理”或“不合理”)，理由是_____。(答一点即可)
【答案】 (1). 乳酸 (2). 比色 (3). 玫瑰红 (4). 重铬酸钾溶液 (5). 酸性环
境下，重铬酸钾能与酒精发生化学反应，变成灰绿色 (6). 发酵时处于通气状态，醋酸菌
将葡萄汁中的糖分解成醋酸，或是将乙醇变为醋酸 (7). 不合理 (8). 面膜的成分中含
有防腐剂，能抑制微生物的繁殖
【解析】
【分析】
泡菜制作的原理主要是利用乳酸菌在无氧条件产生乳酸；果酒的制作原理是利用酵母菌在无
氧条件下产生酒精和 CO2，而检测酒精的产生常常用重铬酸钾溶液，在酸性条件下，重铬酸
钾与酒精发生反应，变成灰绿色；如果制作的果酒缺少酒味而成酸味，说明在此期间通入了
氧气，被大量滋生的醋酸菌发酵转变成了醋酸。
【详解】Ⅰ. (1)泡菜发酵的主要菌种是乳酸菌，所以其中产生的酸主要是乳酸，同时会有少
量的亚硝酸盐产生，常用比色法测定亚硝酸盐的含量，因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应
产物能与 N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红染料。
(2)检测酒精，可用重铬酸钾溶液进行检测，检测原理是酸性环境下，重铬酸钾能与酒精发
生化学反应，变成灰绿色。如果在酿制的苹果酒没有酒味，却有浓烈的醋味，可能的原因就
是发酵时处于通气状态，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸，或是将乙醇变为醋酸。
Ⅱ.结合题意分析，由于面膜的成分中含有防腐剂，能抑制微生物的繁殖，因此“面膜等同于
细菌培养基”的说法不合理。
【点睛】解决本题关键要熟悉泡菜制作、果酒和果醋制作的原理。
11. （2021 年 1 月山西省高三适应性调研考试理科综合生物部分）饮用水安全关乎生命健
康。某兴趣小组检验城市自来水是否达标进行了相关实验，请回答有关问题：
（1）甲同学用涂布平板法检测大肠杆菌数：配制的培养基中含有蛋白胨、酵母膏、NaCl、
H2O 和 X ，其中蛋白胨可为大肠杆菌提供_______和维生素， X 是___________。
（2）乙同学用滤膜法检测大肠杆菌数：用滤膜将已知体积的水过滤后放在 ___________培
养基上培养，在该培养基上大肠杆菌菌落呈现_____色。该方法所统计样品中含菌数往往偏
低的原因是_____。
（3）丙同学检测水样中的细菌总量时，先随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，这
样做的目的是_______。接种后，需要将平板______（填“正置”或“倒置”）培养。统计菌落
总数时，也可以根据__________对菌种进行初步的鉴定。
【答案】 (1). 碳源、氮源 (2). 琼脂 (3). 伊红美蓝 (4). 黑 (5). 当两个或
多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (6). 检验培养基灭菌（或制备）是
否合格 (7). 倒置 (8). 菌落特征
【解析】
【分析】
培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物
生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
2、培养基的制备过程为计算、称量、溶化、调 pH、灭菌、倒平板五个步骤。
3、培养基的种类按照功能分：
种
类
制备方法 特征 用途
选
择
培
养
基
培养基中
加入某种
化学成分
根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化
学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌
样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛
选率
加入青霉素分离得到
酵母菌和霉菌
鉴
别
培
养
基
加入某种
试剂或化
学药品
依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特
定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化
而设计
鉴别和区分菌落相似
的微生物伊红和美蓝
培养基可以鉴别大肠
杆菌
【详解】（1）蛋白胨可以为微生物生长提供碳源、氮源和维生素，由于本实验是用涂布平板
法进行计数，所以需要使用固体培养基，所以 X 是琼脂。（2）滤膜法检测大肠杆菌数是利
用大肠杆菌菌落在伊红美蓝培养基上呈黑色的原理，所以需要用滤膜将已知体积的水过滤后
放在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌菌落呈黑色，由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观
察到的只是一个菌落，所以统计的细菌数目偏低。
（3）将空白平板培养一段时间，是为了检验培养基灭菌（或制备）是否合格，接种后将平
板倒置；可以根据菌落特征（大小、性状、光滑程度等）对菌种进行初步的鉴定。
【点睛】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的营养组成、种类及功能，能
结合所学的知识准确判断各选项。
25. （西南大学附中高 2021 级全国大联考模拟考试题）（1）从自然界中获得的微生物需经
过__________________ 才能应用于工业生产。培养微生物时常用______________________
法对固体培养基进行灭菌处理，为检测灭菌效果可对培养基进行
____________________________ 。
（2）某同学在制作葡萄酒的过程中，为了发酵过程的安全，发酵阶段需适时拧松瓶盖，但
不能完全打开，主要目的是______________。制作葡萄酒利用的微生物适合生长的温度是
_______________ 。
（3）玫瑰精油的化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，挥发性较强，适宜采用
___________法进行提取。经上述方法提取后可收集到乳白色的乳浊液中加入___________
（填“NaCl”或“无水 Na2SO4”）使其分层。
【答案】 (1). 分离和纯化培养 (2). 高压蒸汽灭菌 (3). 不接种培养（或空白培养）
(4). 排出 CO2，防止空气中的杂菌进入发酵瓶，造成污染，影响发酵 (5). 20 度左右 (6).
水蒸气蒸馏 (7). NaCl
【解析】
【分析】
1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其代谢类型为兼性厌氧型，发酵原理是酵母菌进行无
氧呼吸产生酒精，同时发酵过程中产生 CO2，需要定期拧松发酵瓶盖以降低瓶内压强。
2、植物有效成分的提取的主要方法有：蒸馏法、压榨法和萃取法；
（1）玫瑰精油具有较强的挥发性，适用于蒸馏法提取；
（2）橘皮精油如果使用蒸馏法会导致原料焦糊和有效成分水解，所以可以采用压榨法提取；
（3）胡萝卜素不溶于水，易溶于石油醚等有机溶剂，适用于萃取法提取。用萃取法提取胡
萝卜素的效率主要取决于萃取剂的性质和用量，其次还受到原料颗粒大小、紧密程度、含水
量、温度、时间等条件的影响。
【详解】（1）自然界中获得的微生物需要经过分离和纯化培养才能应用于工业生产；培养微
生物时，对固体培养基常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌处理；为检测灭菌效果，通常对培养
基进行不接种培养（或空白培养）；
（2）制作葡萄酒的过程中，在发酵阶段酵母菌无氧呼吸产生 CO2，故需要适时拧松瓶盖，
排出 CO2，但不能完全打开，防止空气中的杂菌进入发酵瓶，造成污染，影响发酵；制作葡
萄酒利用酵母菌进行发酵，适合酵母菌生长的温度是 20 摄氏度左右；
（3）由于玫瑰精油的化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，挥发性较强，故适宜采
用水蒸气蒸馏法提取；要将玫瑰精油与水分离，则需要往提取后的乳白色浊液中加入 NaCl，
使其出现分层。
【点睛】本意考查微生物的培养与分离、果酒的制作、植物有效成分的提取，要求学生熟练
记忆考点的相关重要知识，即可对各小题进行分析解答。
11. （广西河池市 2020 年秋季学期高三期末教学质量检测）随着水果加工技术的发展，可
满足人们不同层次的需求。水果的加工包括制作果汁、果酒、果醋、果干等。回答下列问题。
（1）日常生活中可直接用压榨法生产苹果汁，加入_____和纤维素酶能够提高水果的出汁率
并使果汁变得澄清。纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，其中_____酶
能将纤维二糖分解成葡萄糖。
（2）新鲜的苹果汁可经过发酵制成苹果酒，酵母菌常用于苹果酒的制作，酵母细胞内能产
生 ATP 的场所是_____，酵母细胞无氧呼吸的产物乙醇与_____试剂反应呈现灰绿色，这一
反应可用于乙醇的检验。
（3）若利用固定化细胞技术发酵葡萄糖溶液，与固定化酶技术相比，前者发酵时环境因素
对反应速率的影响更_____（填“大”或“小”），原因是_____。
（4）若想对酵母菌进行计数，平板划线法一般不用于活菌计数的原因是_____（写出一点即
可）。
【答案】 (1). 果胶酶 (2). 葡萄糖苷 (3). 细胞质基质和线粒体（或细胞质基质，
线粒体内膜，线粒体基质） (4). 酸性重铬酸钾 (5). 小 (6). 固定化细胞由于保证
了细胞的完整性，酶的环境改变小，对酶的活性影响较小 (7). 平板划线法不能充分将微
生物菌体分离开；划线用的菌液体积不能确定；每次划线前灼烧接种环会杀死部分微生物。
使计数不准确
【解析】
【分析】
1、果胶酶能够提高葡萄的出汁率并使浑浊的果汁变得澄清，是因为果胶酶能够分解果胶，
瓦解植物的细胞壁及胞间层，使其分解为能溶解的半乳糖醛酸，醋酸菌是严格好氧菌，酵母
菌的既能进行有氧呼吸也能进行无氧呼吸，酵母菌进行酒精发酵时，要进行无氧呼吸。
2、接种微生物常用的方法：①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的
操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。②稀释涂布平板法：将骏业进行一系列的
梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
【详解】（1）植物细胞壁主要成分是纤维素和果胶，压榨法生产苹果汁，用果胶酶和纤维素
酶能够分解果胶和纤维素，提高水果的出汁率并使果汁变得澄清。纤维素酶是一种复合酶，
其中包含葡萄糖苷酶，葡萄糖苷酶能将纤维二糖分解成葡萄糖。
（2）新鲜的苹果汁可经过发酵制成苹果酒，酵母菌常用于苹果酒的制作，酵母细胞是真核
细胞，细胞质基质和线粒体（或细胞质基质，线粒体内膜，线粒体基质）产生 ATP，酵母细
胞无氧呼吸产生乙醇和二氧化碳，乙醇与酸性重铬酸钾反应呈现灰绿色，据此，可用酸性重
铬酸钾检验乙醇。
（3）固定化细胞由于保证了细胞的完整性，酶的环境改变小，对酶的活性影响较小，因此，
利用固定化细胞技术发酵葡萄糖溶液，与固定化酶技术相比，利用固定化细胞技术发酵时环
境因素对反应速率的影响更小。
（4）平板划线法不能充分将微生物菌体分离开，划线用的菌液体积不能确定，每次划线前
灼烧接种环会杀死部分微生物，使计数不准确，因此，平板划线法一般不用于活菌计数。
【点睛】掌握果酒和果醋的制作方法和流程、酵母细胞呼吸作用的检测等，并能用其结合题
干信息综合分析，解决问题。
11. （哈三中 2020－2021 学年度高三年级线上学习阶段性考试）青蒿素为无色针状晶体，
易溶于极性有机溶剂，难溶于水，受热易分解。可以从青蒿的茎叶中提取得到，是治疗疟疾
等疾病的药物，以下为青蒿素的提取流程，请回答下列问题：
（1）图示采用_______________法提取青蒿素，影响因素除萃取剂的性质和使用量，还有
_______________（写出两点即可）。
（2）青蒿叶在粉碎前需要进行____________________________处理，不能用新鲜的叶片，
原因是______________________________________________________________________。
（3）粉碎青蒿叶的目的是____________________________。在减压蒸馏之前，还要对萃取
液进行过滤的原因是________________________________________________________。
（4）萃取液的浓缩采用的是减压蒸馏处理，目的是_________________________。
【答案】 (1). 萃取 (2). 原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间
(3). 干燥 (4). 新鲜的青蒿叶含水量高，用于提取的有机溶剂会被稀释，进而降低对青蒿
素的提取效果 (5). 便于原料和溶剂充分接触，提高萃取效率 (6). 除去萃取液中的不
溶物 (7). 青蒿素受热易分解，通过减压蒸馏既可以去除提取剂，同时可以减少青蒿素的
分解
【解析】
【分析】
植物芳香油的提取方法：
（1）蒸馏法：芳香油具有挥发性。把含有芳香油的花、叶等放入水中加热，水蒸气能将挥
发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物；冷却后，油水混合物又会重新分成油层和水
层，除去水层便得到芳香油，这种提取方法叫蒸馏法。根据蒸馏过程中原料放置的位置的标
准，将水蒸气蒸馏法划分为水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏。
（2）萃取法：这种方法需要将新鲜的香花等植物材料浸泡在乙醚、石油醚等低沸点的有机
溶剂中，是芳香油充分溶解，然后蒸去低沸点的溶剂，剩下的就是芳香油。
（3）压榨法：在橘子、柠檬、甜橙等植物的果皮中，芳香油的含量较多，可以用机械压力
直接榨出，这种提取方法叫压榨法。
【详解】（1）图中所示方法为萃取法。影响萃取效率的因素有萃取剂的性质和使用量、原料
颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等因素。
（2）新鲜的青蒿叶的含水量高，与有机溶剂混入混合会稀释有机溶剂，降低萃取效率，因
此萃取过程粉碎前要进行干燥处理。
（3）萃取材料的颗粒大小会影响萃取率，为提高青蒿素的提取率，可以对青蒿进行干燥破
碎，由此增大青蒿与乙醚的接触面积。减压蒸馏前进行过滤是为了除去萃取液中的不溶物。
（4）萃取液浓缩时要加热蒸发出有机溶剂，而青蒿素受热易分解，进行减压蒸馏需要的温
度较低。通过减压蒸馏既可以去除提取剂，还可以减少青蒿素的分解。
【点睛】本题考查植物芳香油提取的相关知识，意在考查考生的识记能力和理解能力，同时
考查学生结合图文获取信息处理信息的能力。
15. （湖北省 2021 届部分重点中学高三上学期期末联考）下列有关传统发酵技术及其应用
的叙述，正确的是（ ）
A. 制作的葡萄酒酸味较重，是由发酵温度过低造成的
B. 制作果醋时，在液体培养基的表面将会形成单菌落
C. 制作泡菜时，要不定期地揭开坛盖以排出发酵产生的气体
D. 为防止污染，发酵瓶在使用前都必须清洗干净，并晾干、消毒
【答案】D
【解析】
【分析】
1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。
2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当
氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇
变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【详解】A、制作的葡萄酒酸味较重，可能是因为发酵装置漏气，混入了醋酸菌，醋酸菌发
酵产生了醋酸，发酵温度过低一般不会造成制作的葡萄酒酸味较重，A 错误；
B、在液体培养基的表面不能形成单菌落，B 错误；
C、制作泡菜时，利用乳酸菌的无氧呼吸发酵，坛盖边缘水槽用水密封以保证坛中的无氧环
境，不能揭开坛盖，而且乳酸菌无氧呼吸不产生气体，C 错误；
D、为防止污染，发酵瓶要清洗干净，然后用体积分数为 70%的酒精消毒，或用洗洁精洗涤，
不需要严格灭菌，D 正确。
故选 D。
16. （湖北省 2021 届部分重点中学高三上学期期末联考）某科研人员利用郫县豆瓣酱为材
料筛选高产蛋白酶的霉菌，下列利用平板划线法筛选该菌株的做法正确的是（ ）
A. 在每次划线前后都灼烧接种环的目的是防止杂菌污染
B. 接种霉菌后的培养基必须采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌
C. 筛选用的固体选择培养基中必须加入一定量的蛋白质
D. 对筛选的菌株计数时选择菌落数为 30~300 的平板进行计数
【答案】C
【解析】
【分析】
微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养，
在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成
单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可
形成单个菌落。
【详解】A、初次划线灼烧的目的是防止杂菌污染，其后划线后灼烧的目的是杀死上次划线
结束后残留在接种环上的菌种，使下一个区域的菌种只来自上一个区域的末尾，最后一次灼
烧的目的是防止菌体污染环境，A 错误；
B、接种霉菌之前，培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌，B 错误；
C、产蛋白酶的霉菌利用的底物是蛋白质，因此，培养基中需加入一定量的蛋白质，C 正确；
D、平板划线法不能对菌落进行计数，D 错误。
故选 C。
【点睛】本题只需考生掌握平板划线法的基本操作即可，对微生物的计数采用稀释涂布平板
法。
19. （湖北省 2021 届部分重点中学高三上学期期末联考）下列高中生物学实验或实践活动
中，无法达到目的的是（ ）
A. 新鲜的葡萄汁中接种一定量的干酵母菌，发酵制作果酒
B. 消毒后的转基因植物叶片接种到无菌培养基上，培养获得愈伤组织
C. 在蔗糖溶液中加入适量红墨水，可用于观察洋葱鳞片叶内表皮细胞的质壁分离
D. 在含 DNA 的滤液中加入 2 mol／L 的 NaCl 溶液，去除杂质并析出 DNA
【答案】D
【解析】
【分析】
1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。果酒制作的原理：
有氧条件下进行有氧呼吸大量繁殖，无氧条件下进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。
2、植物组织培养要求非常严格的无菌环境，如果灭菌不彻底，培养过程中存在污染，会造
成培养的幼苗生长缓慢甚至培育失败。原理有以下几种：
（1）与幼苗竞争培养基中的营养，由于细菌和真菌繁殖比植物快得多，导致植株得不到营
养。
（2）寄生于植物体内，利用植物细胞中的原料合成菌类自身的物质，导致幼苗死亡。
（3）寄生菌可能导致植物内部的基因改变，当这个基因是对生长必要的基因时，就导致幼
苗的死亡。此外，污染菌的基因可通过某种暂时未知细节的机制转入植物细胞内并表达，从
而导致培养失败。
3、DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同（0.14mol/L溶解度最低），
利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使 DNA 充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达
到分离目的。
【详解】A、果酒的制作原理是利用酵母菌进行无氧呼吸将葡萄汁分解成酒精，A 错误；
B、消毒后的转基因植物叶片接种到无菌培养基上，在添加一定植物激素的基础上，可以生
成愈伤组织，B 错误；
C、洋葱鳞片叶内表皮细胞的细胞液无色，以此为实验材料观察细胞的质壁分离时，在蔗糖
溶液中加入适量的红墨水使之成为红色，会使观察到的质壁分离现象更明显，C 错误；
D、DNA 在 2mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最大，不能析出 DNA，D 正确。
故选 D。
【点睛】
11. （怀仁市 2020- 2021 学年度上学期期末）微生物培养技术在医疗、工业生产、食品生产
等方面均有应用。下表是一种培养基的配方，请回答下列问题：
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水
0．5g 1g 0．5g 2g 200mL
（1）此培养基中的蛋白胨主要为微生物提供______________________。在各种成分溶化后、
分装前，必须进行的操作是___________和灭菌。
（2）临床使用抗生素前，有时需要进行细菌的耐药性试验，其大致过程是：将含有某种细
菌的菌液用___________法接种在培养基表面并进行培养，最终形成单个的菌落；再分别将
含有等剂量不同种抗生素的相同大小的圆形滤纸片置于该平板上有菌落的位置，继续培养一
段时间后，若滤纸片下的菌落死亡，说明该细菌对该抗生素___________（填“敏感”或“不敏
感”）。
（3）用上述方法统计菌落数目时，一般选择菌落在___________的平板进行计数。在进行分
离分解尿素的细菌实验时，A 同学从培养基上筛选出大约 150 个菌落，而其他同学只选择出
大约 50 个菌落。A 同学的实验结果产生的原因可能有___________（填序号）。
①由于培养基污染 ②没有设置对照 ③由于操作失误 ④由于土样不同
（4）在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用___________法，这种方法能够通过颜色反应直
接对纤维素分解菌进行筛选。甲同学在实验时得到了如图所示的结果，则纤维素分解菌位于
___________。
A．①②③ B．②③ C．①② D．③
【答案】 (1). 碳源、氮源和生长因子 (2). 调节 pH (3). 稀释涂布平板 (4). 敏
感 (5). 30～300 (6). ①③④ (7). 刚果红染色法 (8). D
【解析】
【分析】
1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，其基本过程为计算、称量、溶化、调 pH、灭菌、倒平板
五个步骤。
2、从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选
菌株．筛选尿素分解菌应该使用以尿素为唯一氮源的选择培养基，配制培养基的一般操作是
配制培养液、调整 pH、分装、包扎、灭菌、搁置斜面。微生物的计数常用稀释涂布平板法
接种，采用固体平板培养细菌时，要将培养皿倒置。
【详解】（1）培养基中的蛋白胨主要为微生物提供碳源、氮源和生长因子。在各种成分溶化
后分装前，必须进行的是调节 pH 和灭菌。
（2）临床使用抗生素前，有时需要进行细菌的耐药性试验，其大致过程是：将含有某种细
菌的菌液用稀释涂布平板法接种在培养基表面并进行培养，最终形成单个的菌落；再分别将
含有等剂量不同种抗生素的相同大小的圆形滤纸片置于该平板上有菌落的位置，继续培养一
段时间后，若滤纸片下的菌落死亡，说明该细菌对该抗生素敏感。
（3）微生物的计数常用稀释涂布平板法接种，可以获得单个菌落进行统计菌落数目，通常
选择菌落数在 30～300 间的平板进行计数。在进行分离分解尿素的细菌实验时，A 同学从培
养基上筛选出大约 150 个菌落，而其他同学只选择出大约 50 个菌落，分析 A 同学的实验结
果产生的原因可能有：①由于土样不同、②由于培养基污染、③由于操作失误，是否设置对
照实验不影响实验组的菌落数目。故对应题干选①③④。
（4）刚果红是一种染料，可与纤维素形成红色复合物，但不和水解后的纤维二糖和葡萄糖
发生这种反应，在含有纤维素的培养基上添加刚果红时，会形成红色复合物，当纤维素被分
解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明
圈，据此就可以筛选出纤维素分解菌。据甲同学在实验时得到的图示结果分析：图中①是培
养皿，②是培养基，③以纤维素分解菌为中心的透明圈，所以纤维素分解菌位于其内，故选
D。
【点睛】本题主要考查微生物的筛选与分离，培养基的制作过程等知识，意在提高学生对相
关知识点的识记与理解。
6. （川大附中高 2018 级高三第一学月月考）我国利用不同微生物的发酵作用制作食品，历
史悠久，在多种文献中均有记载：
①《齐民要术》中记载：“作盐水，令极咸，于盐水中洗菜，即内雍中。”
②《北山酒经》中记载：“每坛加蜡三钱，竹叶五片，隔水煮开，乘热灌封坛口。”
③《齐民要术》中记载了二十三种利用谷物酿制食醋的工艺。其经历的三个主要发酵过程为：
糖化→酒化→醋化。
④《本草纲目拾遗》中记述：“豆腐又名菽乳，豆腐腌过酒糟或酱制者，味咸甘心。”
下列说法错误的是（ ）
A. ①介绍的是泡菜制作技术，配制的盐水要煮沸冷却后使用
B. ②中加热杀菌保存酒液的原理和方法，与酿酒中普遍使用的巴氏杀菌法基本相同
C. ③中食醋的酿制过程：淀粉先在微生物的作用下分解成葡萄糖，葡萄糖再在酵母菌的作
用下分解成酒精，最后醋酸菌在氧气充足时将糖分解成醋酸，当缺少氧气时将乙醇变为醋酸
D. ④从微生物培养的角度看，豆腐是固体培养基，接种时不需要对其进行严格灭菌
【答案】C
【解析】
【分析】
1、用谷物酿制食醋经历的三个主要发酵过程为：糖化→酒化→醋化。分别是淀粉在微生物
的作用下水解成葡萄糖，葡萄糖在微生物的作用下分解成乙醇和二氧化碳（在无氧的条件
下），乙醇被微生物在有氧的环境下氧化成乙酸。
2、在制作泡菜时所配制的泡菜盐水要煮沸，以杀灭盐水中的微生物，防止杂菌污染。泡菜
制作过程中，温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短、容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐
含量增加。
3、采用较低温度(一般在 60~82℃)，在规定的时间内，对食品进行加热处理，达到杀死微生
物营养体的目的，是一种既能达到消毒目的又不损害食品品质的方法。由法国微生物学家巴
斯德发明而得名。巴氏杀菌热处理程度比较低，一般在低于水沸点温度下进行加热，加热的
介质为热水 。《北山酒经》中记载：“每坛加蜡三钱，竹叶五片，隔水煮开，乘热灌封坛口。”
这种用加热杀菌保存酒液的原理和方法，与酿酒中普遍使用的巴氏杀菌法基本相同。
4、腐乳发酵过程中，豆腐就是毛霉的固体培养基；现代腐乳生产是在严格无菌条件下将优
良的毛霉菌种接种在豆腐上；味咸是因为加了盐，加盐的目的除了调味外，还有抑制微生物
的生长，避免腐败变质以及析出豆腐中的水分、使豆腐变硬的作用，酒的含量一般控制在
12%左右，目的是抑制微生物生长，同时使腐乳具有独特的香味。
【详解】A.根据以上分析可知，①介绍的是泡菜制作技术，配制的盐水要煮沸冷却后使用，
以杀灭盐水中的微生物，防止杂菌污染，A 正确；
B.根据以上分析可知，②中加热杀菌保存酒液的原理和方法，与酿酒中普遍使用的巴氏杀菌
法基本相同，都是采用了低温加热处理的方法，B 正确；
C.传统酿醋工艺先是淀粉在微生物作用下分解成葡萄糖，葡萄糖再在酒化酶的作用下反应生
成乙醇，在氧气充足的条件下，乙醇再被氧化生成乙酸，C 错误；
D.从微生物培养的角度看，豆腐是固体培养基，接种时不需要对其进行严格灭菌，D 正确。
故选 C。
10. （川大附中高 2018 级高三第一学月月考）图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图
乙是脲酶基因转录的 mRNA 部分序列。
（1）图中选择培养基应以________为唯一氮源；鉴别培养基还需添加________作指示剂，
产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________色。
（2）在 5 个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为 105 的土壤样品溶液 0.1 mL，培养一段
时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为 13、156、462、178 和 191。该过程采取的接种方
法是________，每克土壤样品中的细菌数量为________×108 个；与血细胞计数板计数法相比，
此计数方法测得的细菌数较________。
（3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的 mRNA 在图乙箭头所示位
置增加了 70 个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码（终止密码有 UAG、UGA 和 UAA）。
突变基因转录的 mRNA 中，终止密码为________，突变基因表达的蛋白含________个氨基
酸。
【答案】 (1). 尿素 (2). 酚红 (3). 红 (4). 稀释涂布平板法 (5). 1.75
(6). 少 (7). UGA (8). 115
【解析】
【分析】
【详解】试题分析：（1）脲酶能够催化尿素分解为氨，故图中选择培养基应以尿素作为唯一
氮源。由于尿素被分解成了氮，氨会使培养基的碱性增强，pH 升高，使酚红指示剂变红色。
（2）用于计数细菌菌落数接种方法是稀释涂布平板法，统计的菌落数应介于 30~300 之间，
故选择细菌菌落数为 156、178 和 191 的平板计数，每克土壤样品中的细菌数量为
（156+178+191）/3÷0.1×105=1.75×108。由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是
一个菌落，故用此方法测得的细菌数偏低。
（3）密码子由三个相邻的碱基组成，271 个碱基和后面 2 个碱基一起共构成 91 个密码子，
插入的 70 个核苷酸和后面 2 个碱基一起共构成 24 个密码子，后面是 UGA，是终止密码，
翻译结束，表达的蛋白质含 115 个氨基酸。
考点：本题考查微生物的分离，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系
的能力。
11.（川大附中高 2018 级高三上期末考试） 某工厂周边的河水中含有一种有害的难降解的
物质 W，研究人员用化合物 W、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能
高效降解化合物 W 的细菌（目的菌）。
（1）该实验制备的培养基在功能上属于______培养基，该培养基在营养物质上的特点是
_____。
（2）为了检验培养基是否灭菌合格，常用的实验思路是____________。
（3）可根据____________（至少填 2 项）等菌落特征初步判断培养基上菌种的类型。
（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是
____________。
（5）将获得的 3 种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在 1L 含 20mg 有机化合物 W 的相
同培养液中培养（培养液中其他营养物质充裕、条件适宜观察从实验开始到微生物停止生长
所用的时间，甲、乙、丙分别为 18 小时、40 小时、25 小时，则应选择微生物____________
（填“甲”“乙”或“丙”）作为菌种进行后续培养，理由是____________。
【答案】 (1). 选择 (2). 以化合物 W 为唯一碳源氮源 (3). 将若干未接种的（空
白）培养基在适宜的条件下培养，观察培养基上是否有菌落产生 (4). 菌落的大小、形状、
隆起程度和颜色等 (5). 避免杂菌对环境造成污染 (6). 甲 (7). 甲分解化合物 W
的能力比乙、丙强
【解析】
【分析】
1、灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）；包括灼烧
灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等。
2、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；培
养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基
还需要满足微生物生长对 pH、特殊营养物种和氧气的要求。
【详解】（1）本实验目的是筛选到能高效降解化合物 W 的细菌（目的菌），因此选用的培养
基从功能上属于选择培养基；培养基中一般含有水、碳源、氮源、无机盐，化合物 W 在该
培养基中作为碳源和氮源，这是该选择培养基的特点。
（2）将若干未接种的（空白）培养基在适宜的条件下培养，观察培养基上是否有菌落产生，
可用于检验培养基是否灭菌合格。
（3）菌落的特征包括菌落的大小、形状、隆起程度和颜色等。
（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，是为了避免杂菌对环境造
成污染。
（5）微生物停止生长意味着化合物 W 被分解完，甲菌种需要的时间比乙、丙少，说明微生
物甲分解化合物 W 的能力比乙、丙强。
【点睛】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记相关知识点，意在考查学生识记所学
知识要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力，同时获取题干信息准确答题。
11.（2021 届四川省六市第一次诊断性考试理综） 尿素是农业生产中经常使用的一种含氮量
很高的化肥，过量使用尿素会对环境造成污染。土壤中某些细菌能将尿素分解作为其生长的
氮源。回答下列问题：
（1）某同学将土壤溶液中的微生物进行分离纯化时，采用了两种不同的接种方法，培养一
段时间后得到如图所示的菌落。
平板 A 所采用的接种方法是_________，平板 B 所采用的接种方法是__________。A、B 两
个平板所采用的接种方法适合用来计数的是_____（填“A”或“B”）。
（2）另一位同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是
____。若要利用这些菌落继续分离形成单个菌落，接下来的步骤是_________
（3）若用含有酚红指示剂的培养基筛选能分解尿素的细菌，从功能上划分该培养基属于
______培养基。尿素被分解后产生的氨会使培养基 pH 升高，酚红指示剂将变成红色，据此
原理，若在培养基中观察到_____________，就可以初步判定这种细菌能够分解尿素。
【答案】 (1). 稀释涂布平板法 (2). 平板划线法 (3). A (4). 菌液浓度过高
(5). 挑取菌落稀释成适宜浓度的菌液，在灭菌的平板上进行划线(或涂布)接种，然后置于适
宜条件下培养 (6). 鉴别 (7). 菌落周围出现红色环带
【解析】
【分析】
尿素分解菌广泛存在于土壤中，其可以产生脲酶，使尿素被分解成氨，使 pH 呈碱性，从而
使添加酚红指示剂的鉴别培养基上的菌落周围会出现红色环带。分离尿素分解菌时常用的灭
菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌、干热灭菌．在实验操作过程中，为防止杂菌污染操作要
在酒精灯火焰旁操作，接种后的培养皿倒置于 37℃的恒温培养箱中培养。
【详解】（1）根据培养基中菌落的分布判断平板 A 所采用的接种方法是稀释涂布平板法，
平板 B 所采用的接种方法是平板划线法，其中稀释涂布平板法是将菌液稀释到一定浓度，
取一定量菌液涂布在平板上，适合用来计数。
（2）纯化细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，很可能是菌液浓度过高，接种时无法将
细菌分散开来。若要利用这些菌落继续分离形成单个菌落，接下来需要挑取菌落稀释成适宜
浓度的菌液，在灭菌的平板上进行划线(或涂布)接种，然后置于适宜条件下培养。
（3）尿素被分解后产生的氨会使培养基 pH 升高，酚红指示剂将变成红色，据此原理，用
含有酚红指示剂的培养基筛选能分解尿素的细菌，在培养基中会观察到能分解尿素的细菌菌
落周围会出现红色环带，据此可以初步判定这种细菌能够分解尿素，从功能上看该培养基属
于鉴别培养基。
【点睛】本题主要考查尿素分解菌的分离原理和基本操作技术的知识点，意在加强学生实验
的物生物的培养无菌操作意识，提高实验技能，强化基础操作和实验原理的理解。
11.（2021 届四川省泸州市高三第一次教学质量诊断性考试） 利用传统发酵技术制作食品，
历史悠久，请参照表中内容完成下表。
食品名称 葡萄酒 葡萄醋 腐乳 泡菜
常用菌种分类 真核生物 原核生物 （1）_________ 原核生物
制作原理
无氧呼吸产生酒
精
当缺少糖源时，
（2）_________
蛋白酶、脂肪酶水
解蛋白质和脂肪
无氧呼吸产生乳酸
实验流程
发酵
条件
控制
温度 （4）_______ 30~35℃ 15~18℃ 室温
氧气
前期需氧后期无
氧
全过程需氧 全过程需氧 （5）_________
问题探究
问题一：腐乳制作时，卤汤中酒需要控制在 12%，原因是（6）____________。
问题二：泡菜发酵过程中，亚硝酸盐含量变化是（7）____________。
（1） _________，（2）_________，（3）_________，（4）_________，（5）_________，（6）
_________，（7）_________
【答案】 (1). 真核生物 (2). 醋酸菌可以乙醇转化为乙醛，再转化成醋酸 (3). 冲
洗 (4). 18-25℃ (5). 无氧 (6). 酒精含量过高，使腐乳成熟期延长；含量过低，杂
菌繁殖，易变质 (7). 先增后减
【解析】
【分析】
酒精发酵的主要菌种是酵母菌，果醋发酵的菌种是醋酸菌，腐乳制作主要依靠毛霉，泡菜制
作的主要菌种是乳酸菌。
【详解】（1）腐乳制作中起主要作用的是毛霉，是真核生物；
（2）当缺少糖源时，醋酸菌可以在将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸；
（3）果酒制作过程中，挑选葡萄糖后需要先冲洗再榨汁；
（4）酵母菌进行酒精发酵的适宜温度是 18-25℃；
（5）泡菜制作需要在无氧条件下进行；
（6）腐乳制作中卤汤中酒的含量一般控制在 12%左右，酒精含量过高，会导致腐乳成熟的
时间延长，过低，会导致杂菌生长，引起变质；
（7）泡菜发酵中，亚硝酸盐的含量会先增加，10d 左右会下降。
【点睛】需要考生区分各种发酵过程所需的菌种、原理及流程。
11. （河南省名校联盟 2020-2021 学年高三 1 月联考）纤维素酶广泛存在于自然界的细菌、
真菌等生物中。为纯化菌种，在鉴别培养基上接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。回
答下列问题：
（1）纤维素酶是一种复合酶，它至少包括_____________________三种组分，即若实验小组
从不同微生物中分别获取了纤维素酶，同等条件下对纤维素进行水解得到的各产物含量不完
全相同，原因可能是____
（2）对培养皿常用的灭菌方法及目的分别是_____________________据图判断该纯化培养能
否达到纯化的目的，并写出判断依据_____________________
（3）图示中采用的接种微生物的方法是______________法，该方法把聚集的菌种逐步分散
到培养基的表面，为达到这一目的，应注意的操作有_______________（至少答 2 点）
（4）为弄清固体培养基中的非目的菌落来自菌种还是培养基，应设置对照组为___________
【答案】 (1). C1 酶、Cx 酶和葡萄糖苷酶 (2). 不同微生物所含酶的组成比例不同、
每种酶的活性不同 (3). 干热灭菌法、杀死全部微生物 (4). 能，因为已经出现单个菌
落 (5). 平板划线 (6). 每次划线前接种环要灼烧、冷却后从上一次划线的末端开始划
线 (7). 配制的培养基灭菌后不接种菌种，与实验组放在相同条件下培养
【解析】
【分析】
纤维素的单体是葡萄糖，纤维素酶能够将纤维素分解为葡萄糖。纤维素酶是一种复合酶，包
括 C1 酶、CX 酶和葡萄糖苷酶。纤维素分解菌可以用刚果红染液进行鉴别，能够产生透明圈
的菌落就是纤维素分解菌。
【详解】（1）纤维素酶是一种复合酶，它至少包括 C1 酶、Cx 酶和葡萄糖苷酶三种组分。由
于不同微生物所含酶的组成比例不同、每种酶的活性不同，所以若实验小组从不同微生物中
分别获取了纤维素酶，同等条件下对纤维素进行水解得到的各产物含量会不完全相同。
（2）对培养皿常用干热灭菌法灭菌，目的是杀死全部微生物。图中属于平板划线法分离菌
体，由图可知，已经在培养皿上出现了单个菌落，所以该图中方法能得到纯化的菌种。
（3）据图分析，图示表示平板划线法接种，是把聚集的菌种逐步稀释到培养基的表面，操
作上应注意每次划线前接种环要灼烧；冷却后从上一次划线的末端开始划线，以保证每次划
线起始段的菌体都来自上次划线的末端。
（4）为弄清固体培养基中的非目的菌落来自菌种还是培养基，应设置对照组为：配制的培
养基灭菌后不接种菌种，与实验组放在相同条件下培养。
【点睛】本题考查微生物的接种方法、纤维素酶的种类、微生物的培养等相关知识，意在考
查考生对所学知识的综合应用能力。
11. （ 2020-2021 学年高三 11 月阶段性测试）果汁制作是常用的水果
加工技术之一，不仅可以缓解产销矛盾，而且能够提高产品的附加值。由霉菌发酵生产的果
胶酶是食品加工业中使用量最大的酶制剂之一，被广泛地应用于果汁加工业。图 1 为从黑曲
霉菌中提取果胶酶的流程图。回答下列有关问题：
（1）果胶酶包括_________________等，生产果汁时，为了使果胶酶得到充分的利用，除了
控制好温度和 pH 外，还需要控制好_____________________。
（2）图中步骤 A 为__________，该步骤常采用透析法，目的是________________。
（3）蛋白质纯化可采用______________，纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯
度的鉴定，使用最多的鉴定方法是_______________________。
（4）为了使酶能够被重复利用，节约成本，可将果胶酶进行固定化。一般来说，酶不适合
采用包埋法进行固定，分析其原因是______________。图 2 中甲、乙分别为 MCM 一 48 用
量及果胶酶浓度对果胶酶固定效果的影响，据图可知，固定化果胶酶较适宜的条件是
____________________________。
【答案】 (1). 多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶 (2). 酶的用量 (3). 粗
分离 (4). 除去分子量较小的杂质 (5). 凝胶色谱法（分配色谱法） (6). SDS—聚
丙烯酰胺凝胶电泳 (7). 酶分子小，易从包埋材料中漏出 (8). MCM 一 48 用量 0.05g、
果胶酶浓度 0.5mg/ml
【解析】
【分析】
由题图可知，图甲表示 MCM-48 用量与果胶酶吸附量的关系，在 0-0.05g 中，MCM-48 用量
越多，果胶酶吸附量越多，超过 0.05g 后，MCM-48 用量越多，果胶酶吸附量越少；图乙表
示果胶酶浓度与果胶酶吸附量的关系，0-0.5mg/ml 中，果胶酶吸附量随果胶酶用量增加而增
加，在 0.5mg/ml 之后，果胶酶增加，果胶酶吸附量不再增加，达到吸附上限。
【详解】（1）果胶酶包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶；为了使果胶酶得到充
分利用，除控制好温度和 pH 外，还需要控制果胶酶的用量，避免造成浪费；
（2）图中步骤 A 在样品处理之后纯化之前，为粗分离过程；常采用透析法，目的是除样品
中分子量较小的杂质；
（3）蛋白质纯化一般采用凝胶色谱法分离蛋白质，鉴定蛋白质纯度的最常用方法是 SDS-
聚丙烯酰胺凝胶电泳；
（4）酶由于分子小，使用包埋法容易从包埋材料中漏出；分析图甲与图乙中的转折点可知，
MCM-48 用量 0.05g、果胶酶浓度 0.5mg/mL 为固化果胶酶较适宜的条件。
【点睛】本题考查果汁制作过程中使用的果胶酶的相关知识，在基础知识扎实的前提下，加
入考虑在实际生产加工中，固定化果胶酶时需要考虑到的效率问题，即经济效率最大化，则
需要考虑到果胶酶使用率最大化的情况。
11. (四川省广安市北师大广安实验学校 2020-2021 学年高三 12 月月考)人工瘤胃模仿了牛
羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果，研究
人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究。请回答下列问题：
（1）牛胃中分解纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由 3 种组分组成的复合酶，其中
的葡萄糖苷酶可将___________分解成__________。
（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR 可与纤维素形成_____________色复
合物。用含有 CR 的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心
的___________。研究人员在刚果红培养基平扳上筛到了几株有透明降解圈的菌落（见由图）。
图中降解圈大小与纤维素酶的_____________有关。图中降解纤维素能力最强的菌株是
______________（填圈中序号）。
（3）该小组采用稀释涂布平板法检测样品中纤维素分解菌含量。在涂布接种前，随机取若
干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________；然后，将
1mL 水样稀释 100 倍，在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1mL 稀释液；经适当培养后，3
个平板上的菌落数分别为 39、38 和 37。据此可得出每升样品中的活菌数为__________。
（4）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过______灭菌。在第二
次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是
__________________。
【答案】 (1). 纤维二糖 (2). 葡萄糖 (3). 红 (4). 透明圈 (5). 多少和活性
(6). ① (7). 检测培养基平板灭菌是否合格 (8). 3.8×107 (9). 灼烧 (10). 将聚
集的菌体逐渐稀释分散以便获得由单个细胞繁殖而来的菌落
【解析】
【分析】
分解纤维素的微生物的分离：
（1）实验原理：
①土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶．纤
维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利
用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则
不能生长。
②在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红
色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分
解菌。
（2）实验过程：土壤取样：采集土样时，应选择富含纤维素的环境→梯度稀释：用选择培
养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度→梯度稀释→涂布平板：将样品涂布于含刚果红的鉴
别纤维素分解菌的固体培养基上→挑选产生中心透明圈的菌落：产生纤维素酶的菌落周围出
现透明圈，从产生明显的透明圈的菌落上挑取部分细菌，并接种到纤维素分解菌的选择培养
基上，在 30-37℃条件下培养，可获得较纯的菌种。
【详解】（1）牛胃中分解纤维素的微生物能分泌纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，包括
C1 酶、CX 酶和葡萄糖苷酶，其中的葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。
（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR 可与纤维素形成红色复合物。用含
有 CR 的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈。
在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落，降解圈大小与纤维素酶的多少和
活性有关。纤维素酶的量越多，活性越强，分解的纤维素越多，透明降解圈越大，所以图中
降解纤维素能力最强的菌株是①。
（3）若该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量，在涂布接种前，随机取若干灭
菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格；然后，
将 1mL 水样稀释 100 倍，在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1mL 稀释液；经适当培养后，3
个平板上的菌落数分别为 39、38 和 37。据此可得出每升水样中的活菌数为（39+38+37）
/3×100×10×103=3.8×107。
（4）对接种环常用的灭菌方法是灼烧灭菌；在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线
的末端开始划线的目的是：将聚集的菌体逐渐稀释分散以便获得由单个细胞繁殖而来的菌
落。
【点睛】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记土壤中分解纤维素的微生物的分离的
原理和实验操作，并结合题图信息完成试题的解答。
11. (四川省眉山市仁寿县铧强中学 2020-2021 学年高三 10 月月考)据有关媒体报道：手机
屏幕上的细菌比马桶按钮上的细菌的种类和数量多，为验证这一说法，中央电视台和北京电
视台分别进行了相应的实验进行调查，相关实验环节如下：
请回答下列相关问题：
（1）实验中将菌悬液接种到培养皿上的方法是__________，所使用的接种工具是
__________。
（2）为确保实验的可信度，在恒温培养接种有菌悬液平板的同时，还应__________。
（3）为确定马桶按钮上是否存在大肠杆菌，还应在培养基中加入__________用于鉴别，若
出现__________菌落，则说明马桶按钮上有大肠杆菌。
（4）两个电视台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，你认为可能原因
是___________。
（5）如需统计平板上菌落数，应每隔__________统计一次，选取数目稳定时的记录作为结
果，以防止___________________。
【答案】 (1). 稀释涂布平板法 (2). 涂布器 (3). 培养未接种的（空白）培养基
(4). 伊红美蓝 (5). 黑色 (6). 取样对象不同 (7). 24h (8). 因培养时间不足而
导致遗漏菌落的数目
【解析】
【分析】
常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是指把混杂在一起的微生物或
同一微生物群体中的不同细胞，用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较
多独立分布的单个细胞，并让其成长为单菌落的方法。稀释涂布平板法是将待测样品制成均
匀的系列稀释液，取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的
培养基内。
【详解】（1）图中培养皿上菌落分布均匀，应是使用涂布器，运用稀释涂布平板法进行接种。
（2）在恒温培养接种有菌悬液平板的同时，还应恒温培养未接种的培养基，以检验平板是
否灭菌合格，从而增加实验的可信度。
（3）大肠杆菌与伊红美蓝发生反应，形成黑色菌落。因此，伊红美蓝试剂常常用来检测大
肠杆菌。
（4）两家电视台结果相反，可能是由于选取样本不同或取样时间不同等原因。以手机为例，
不同的手机不同的屏幕位置，所含的菌种的数量都会不同。
（5）在统计菌落数目时，每隔 24h 统计一次，应选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这
样可以防止因培养时间不足而导致遗落菌落数目。
【点睛】解答本题学生需要对微生物培养的相关知识有一定程度的了解。熟悉常用的接种方
法和菌种的计数方法。
11. (四川省 2020-2021 学年高三上学期第四次月考)藿香正气丸、藿香正气水
的主要药用成分都是广藿香油，其中藿香正气水是深棕色的澄清液体。某研究者将成熟的广
藿香草茎叶进行干燥、堆放处理后，粉碎过 60 目筛，以此为原料进行提取广藿香油的相关
研究（如下图）。请回答下列问题：
（1）上述提取广藿香油的方法为_____。步骤①②中加入的物质分别是_____、_____。
（2）下表是实验结果记录表，据表可知最佳的提取条件为_____。
实验
号
乙醇浓度（%vol） 浸泡温度（℃） 提取时间（h） 出油量[mg·（100g）]-1
1 60 40 8 1．38
2 60 50 9 1．75
3 60 60 10 1．50
4 70 40 8 1．47
5 70 50 9 1．95
6 70 60 10 1．35
7 80 40 8 1．37
8 80 50 9 1．30
9 80 60 10 1．86
（3）与藿香正气丸不同的是，藿香正气水中含 40%～50%的醇，_____（填“能”或“不能”）
用酸性重铬酸钾溶液鉴定其中的乙醇，原因是_____。
（4）用于研究广藿香油的抑菌活性的活菌可以用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行培养和分离，
牛肉膏蛋白胨培养基中的蛋白胨提供的主要营养有_____（答三种）。
【答案】 (1). 水蒸气蒸馏法 (2). NaCl (3). 无水 Na2SO4 (4). 70%乙醇、50℃
浸泡、提取 9h (5). 不能 (6). 藿香正气水自身的颜色会影响鉴定实验颜色的呈现
(7). 碳源、氮源和维生素
【解析】
【分析】
水蒸气蒸馏法是植物芳香油提取的常用方法，它的原理是将挥发性较强的植物芳香油携带出
来，形成油水混合物，冷却后，混合物又会重新分离出油层和水层。在油水混合物中加入
NaCl 可以使油水混合物分层明显，促进油水分离，然后用分液漏斗把油水分离。分离出来
的精油中可以加无水硫酸钠吸收水分。粗分离后，可以采用其他方法继续纯化。
【详解】（1）从题中可以看出，提取过程中首要是利用水蒸气将挥发性较强的广藿香油携带
出来，形成油水混合物，冷却后又重新分离出油层，所以提取广藿香油的方法为水蒸气蒸馏
法。步骤①为加入氯化钠，目的是让氯化钠溶于水，增加水的密度，使油水混合物分层明显。
步骤②为加入无水硫酸钠，目的是出去精油中的水分。
（2）最大出油量时的提取条件为最佳条件，根据表中的实验结果可知，最大出油量时对应
的提取条件为 70%乙醇、50℃浸泡、提取 9h。
（3）藿香正气水中含 40%~50%的乙醇，理论上乙醇可以用酸性的重铬酸钾来鉴定，但是鉴
定过程中要观察颜色的变化，而霍香正气水是深棕色的澄清液体，其自身的颜色会影响鉴定
实验结果的观察。所以不能用酸性重铬酸钾溶液鉴定其中的乙醇。
（4）牛肉膏蛋白胨培养基中的蛋白胨内含多种有机物，可以提供的主要营养有碳源、氮源
和维生素。
【点睛】本题考察了植物有效成分的提取，其中分离油层过程中加入氯化钠和无水硫酸钠的
目的和原理是易漏知识点。
11.(西藏 20202021 学年高三上学期第五次月考) 某研究小组发现类产碱假单胞菌
对黄脊竹蝗有较强的感染力，并可引起其发病死亡，该小组成员以此展开实验探究。回答下
列问题：
（1）用来培养类产碱假单胞菌的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，在此培养基中，为微生物
提供碳源的物质是_____。培养基配制时，灭菌和调 pH 的先后顺序为______________。对
培养基进行灭菌所用的仪器是___________________。
（2）在培养类产碱假单胞菌的过程中，培养皿应倒置培养，其原因是
________________________。
（3）进行实验时，若要频繁使用类产碱假单胞菌，可以采用_________________的方法对其
进行保存，这种方法的缺点是_______。
（4）研究发现；黄脊竹蝗幼虫在自然状态下感染类产碱假单胞菌后，于 24 小时后开始死亡，
72 小时达到死亡高峰，染病后出现行动迟缓，伴有轻微痉挛的现象。为验证此菌是蝗虫致
死的原因，该研究小组成员从病死虫尸中提取并分离得到该菌，并用该菌
_________________，观察到的现象是___________________。
【答案】 (1). 牛肉膏、蛋白胨 (2). 先调 pH，后灭菌 (3). 高压蒸汽灭菌锅 (4).
防止皿盖上凝结的水珠滴落到培养基上造成污染 (5). 临时保藏 (6). 保存的时间不
长，菌种容易被污染或产生变异 (7). 感染生理状况良好的黄脊竹蝗幼虫 (8). 感染后
的幼虫出现行动迟缓，伴有轻微痉挛现象
【解析】
【分析】
1、培养基的成分包括碳源、氮源、水和无机盐。
2、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：其基本过程为计算、称量、溶化、调 pH、灭菌、倒平板
五个步骤。
3、菌种的保藏：甘油管藏法和临时保藏
【详解】（1）牛肉膏蛋白胨培养基中，为微生物提供碳源的是牛肉膏和蛋白胨；配制培养基
需要先调节 pH，在灭菌，以防止调节 pH 过程中引入杂菌；灭菌的方法是高压蒸汽灭菌法，
所以需要用到高压灭菌锅。
（2）为了防止皿盖上凝结的水珠滴落到培养基上造成污染，所以培养皿应倒置培养。
（3）频繁使用类产碱假单胞菌，可以采用临时保藏的方法保存；该方法保存的时间不长，
菌种容易被污染或产生变异。
（4）为证明产碱假单胞菌是蝗虫致死的原因，需要从病死虫尸中提取并分离得到该菌，并
用该菌感染生理状况良好的黄脊竹蝗幼虫，如果感染后的幼虫出现行动迟缓，伴有轻微痉挛
现象，即可证明。
【点睛】本题考查微生物培养的基本知识，需要考生识记培养基的营养、配制方法及菌种的
保藏方法。
11. (新疆昌吉九中 2020-2021 学年高三上学期期末)下表是筛选异养型细菌的培养基配方。回
答下列问题：
KH2PO4 1.4 g
Na2HPO4 2.1 g
MgSO4·7H2O 0.2 g
FeCl3 0.1 g
X 1 g
维生素 微量
琼脂 15 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到 1 000 mL
（1）苯胺是致癌物质，土壤中有分解苯胺的异养型细菌，若要筛选此异养型细菌，则此培
养基中的成分 X 除了为目的菌提供能源外，还能提供________，该培养基从物理性质看属
于________培养基。中学实验室中对培养基进行灭菌的常用方法是________。接种前，用灭
菌后未接种的培养基培养一段时间，观察是否形成菌落，目的是__________________。
（2）如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，获得图 A 效果的接
种方法是__________________________。运用获得图 B 效果的方法接种时，操作上应注意
每次划线前要灼烧____________。
（3）在以尿素为唯一氮源的培养基中加__________可初步鉴定该种细菌能否分解尿素；在
筛选能够分解纤维素的微生物过程中，常用到__________染色法。
【答案】 (1). 碳源和氮源 (2). 固体 (3). 高压蒸汽灭菌法 (4). 判断培养基灭
菌是否彻底 (5). 稀释涂布平板法 (6). 接种环 (7). 酚红指示剂 (8). 刚果红
【解析】
【分析】
微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无机盐等，有的微生物还需要特殊的营养物质，
如生长因子等。筛选与分离微生物常常需要选择培养基，接种方法常用稀释涂布平板法或平
板划线法等。据图分析：图中 A 培养皿中的接种方法为稀释涂布平板法，图 B 中的接种方
法为平板划线法。
【详解】（1）成分 X 为目的菌提供能源，说明 X 是含碳有机物，能提供碳源，同时表中缺
少氮源，那么氮源也必然是由成分 X 提供。该培养基含琼脂，从物理性质看属于固体培养
基。中学实验室中对培养基进行灭菌的常用方法是高压蒸汽灭菌法。接种前，用灭菌后未接
种的培养基培养一段时间，观察是否形成菌落，目的是判断培养基灭菌是否彻底。
（2）微生物培养的两种接种方法有稀释涂布平板法、平板划线法，根据培养的效果图可以
断定 A 是稀释涂布平板法，B 是平板划线法，注意每次划线前要灼烧接种环。
（3）在以尿素为唯一氮源的培养基中加酚红指示剂可初步鉴定该种细菌能否分解尿素；在
筛选能够分解纤维素的微生物过程中，常用到刚果红染色法。
【点睛】本题主要考查微生物培养的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握实
验注意点的能力。
(2021 届湖南省高三八省联考考前猜题生物试题)21. 漆树种子中的油脂（不溶
于水，易溶于脂溶性有机溶剂）可开发为生物柴油目前常用溶剂法萃取漆树种子油脂，其过
程为：漆树种子→粉碎→干燥→加溶剂→水浴加热①→过滤→浓缩②→收集油脂。回答下列
问题：
（1）对漆树种子油脂进行萃取时，为不影响油脂品质和提取效果，应使用___________（填
“自然晾干”或“高温烘干”或“新鲜”）的漆树种子。粉碎漆树种子的目的是___________。
（2）利用不同溶剂进行萃取时，发现油脂的萃取得率和某些重要理化性质的影响不同，实
验结果如下表。
丙酮 石油醚 乙醛 正己烷 混合溶剂
萃取得率 23．72% 26．35% 25．30% 26．17% 28．73%
酸值 8．26 7．96 8．12 7．98 8．13
过氧化值 9．82 5．73 5．83 6．13 7．53
（注：酸值高，说明油脂品质差；过氧化物是油脂变质过程中的中间产物，其含量常用过氧
化值来表示）
实验结果表明，___________作为萃取溶剂较为合理，理由是________________。
（3）提取过程中①、②过程的装置名称分别是___________、___________。以上两种装置
中都需要使用冷凝管，过程①中冷凝管的作用是___________。
【答案】 (1). 自然晾干 (2). 便于和溶剂充分接触，提高萃取效率（得率） (3). 石
油醚 (4). 萃取得率较高，可得到较多的油脂，酸值和过氧化值最小，说明油脂品质较高
(5). 萃取 (6). 蒸馏 (7). 防止加热时有机溶剂挥发
【解析】
【分析】
萃取法是将粉碎、干燥的植物原料用有机溶剂浸泡，使芳香油溶解在有机溶剂中的方法。芳
香油溶解于有机溶剂后，需要蒸发出有机溶剂。萃取的效果主要取决于萃取剂的性质和使用
量，同时还受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响。萃
取液的浓缩可直接使用蒸馏装置。
【详解】（1）因为新鲜的种子含水量高，用于提取的有机溶剂会被水稀释，进而降低对油脂
的提取效果，而高温烘干会改变油脂的结构，所以对漆树种子油脂进行萃取时，为不影响油
脂品质和提取效果，应使用自然晾干的漆树种子。为了便于材料和溶剂充分接触，提高萃取
效率，应粉碎漆树种子。
（2）依据表格数据可知：与用其他有机溶剂作为萃取溶剂时相比，用石油醚作为萃取溶剂
时，萃取得率最高，可得到较多的油脂，酸值和过氧化值最小，说明油脂品质较高，因此用
石油醚作为萃取溶剂较为合理。
（3）提取过程中①为萃取，萃取液的浓缩可直接使用②蒸馏装置。在浓缩之前，还要进行
过滤，除去萃取液中的不溶物。为避免明火加热，采用水浴加热，这是因为有机溶剂一般是
易燃物，直接使用明火加热容易引起燃烧、爆炸。为了防止加热时有机溶剂挥发，还要在①
装置的加热瓶口安装回流冷凝装置。
【点睛】本题以用溶剂法萃取漆树种子油脂为载体考查与萃取相关的知识。解题的关键是识
记并理解用萃取法提取植物芳香油的原理、过程及注意事项等相关知识，并从表格数据中获
取有效信息，进而结合题意作答。
(2021 届陕西省渭南市高三教学质量检测)25. 邻苯二甲酸酯（PAEs）是塑料增塑剂，具有生
殖毒性和神经毒性，会影响农产品的质量和危害人体健康。科研人员从活性污泥中分离得到
PAEs 高效降解菌，流程如下图所示。回答下列问题∶
（1）培养 PAEs 高效降解菌时，培养基中的营养物质有水、_____和无机盐。富集培养的
目的是_____，在样品稀释的过程中，须注意_____以防杂菌污染。
（2）图中用于筛选培养目的菌的平板上唯一的碳源物质是_____。用稀释涂布平板法统计菌
落数目时，一般选择菌落数在_____个的平板进行计数。若当稀释倍数为 105 时平板上的平
均菌落数平均菌落数为 210 个，接种稀释液的体积为 0.2mL，则每毫升样品中的细菌数为
_____。
（3）本实验利用菌落计数的原理是基于_____，运用这种方法统计的结果往往比实际值
_____。
【答案】 (1). 碳源、氮源 (2). 增加目的菌的浓度，确保从样品中分离得到目的菌
(3). 无菌操作 (4). 邻苯二甲酸酯（或PAEs） (5). 30～300 (6). 1.05×108 (7). 一
个菌落代表一个细菌单细胞 (8). 小
【解析】
【分析】
1、培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微
生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添
加维生素，培养霉菌时需将培养基的 pH 调至酸性，培养细菌时需将 pH 调至中性或微碱性，
培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
2、微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接
种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，
菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释
后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】（1）培养基的基本营养物质包括水、无机盐、氮源和碳源；为了增加目的菌的浓度，
确保从样品中分离得到目的菌，通常需要进行富集培养；在微生物培养应注意无菌操作。
（2）据题干信息可知，该实验目的为“从活性污泥中分离得到 PAEs 高效降解菌”，故为筛
选出该目的菌，所用培养基应以邻苯二甲酸酯（或 PAEs）为唯一碳源，在该培养基上，其
他微生物不能生长；用稀释涂布平板法统计菌落数目时，一般选择菌落数在 30～300 个的平
板进行计数；若当稀释倍数为 105 时平板上的平均菌落数为 210 个，所用稀释液的体积为
0.2mL，则每毫升样品中的细菌数约为 210÷0.2×105=1.05×108 个。
（3）稀释涂布平板法的原理为将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，
经培养后可形成单个菌落，即一个菌落代表一个细菌单细胞；用这种方法统计的结果往往较
实际值偏小，原因是个别菌落可能是由 2 个或多个细菌形成。
【生物一选修 1：生物技术实践】
(2021 届四川省绵阳市高三第二次诊断性测试理综生物试题)11. 废弃的口罩属于医疗废物，
必须按照国家有关法规进行处理。某科研团队欲筛选出能高效降解一次性口罩的细菌，设计
流程如下图。已知一次性口罩的的主要成分是聚丙烯纤维（由 C、H 两种元素组成）。回答
下列问题：
（1）土壤是微生物的大本营，可从中分离出目的菌。流程图中甲步骤是______用来提高目
的菌的比例和密度。
（2）如果你参与到这个团队中，请设计一个对照实验，既替代原有的样品采集方案，又省
略掉甲步骤。
①采集来自________的等量土壤，编号为 A、B、C.·····。将同型号的等量一次性口罩经
_______处理后埋入各组土壤中。
②一段时间后，观察各组中口罩的腐烂程度。
③从口罩腐烂程度__________的一组上采集细菌样品。
（3）稀释涂布平板法可以用来分离纯化细菌，原因是当样品稀释度足够高时，
_____________。从涂布平板后开始，每隔 6 小时统计一次平板上的菌落数，请完善一个坐
标系，并画出在符合计数要求的平板上，菌落数目在 36 小时内的变化曲线。__________
（4）将分离纯化得到的不同菌种分别接种到鉴别培养基上。鉴别培养基以聚丙烯纤维为唯
一碳源，并加入了能与之结合的显色染色剂。设不同菌种的菌落面积为 s，菌落周围透明圈
的面积为 S，那么，选择_____________的菌落，就是能高效降解一次性口罩的目的菌群。
【答案】 (1). 选择培养（扩大培养） (2). 不同环境（不同地区） (3). 灭菌 (4).
最 大 (5). 每 一 个 菌 落 都 来 源 于 分 散 的 单 个 细 菌 (6). 见 图
(7). S/s 的比值最大（s/S 的
比值最小）
【解析】
【分析】
稀释涂布平板法是将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形
成单个菌落。筛选高效降解一次性口罩的细菌的流程：样品采集→扩大培养→分离纯化→鉴
别培养。
【详解】（1）采集的样品中目的菌数量可能较少，所以需要经过甲步骤，即选择培养（扩大
培养）以增加目的菌的浓度。
（2）①不同类型土壤中微生物的种类和数量不同，可采集来自不同环境（不同地区）的等
量土壤，编号为 A、B、C·····。将同型号的等量一次性口罩经灭菌处理后埋入各组土壤中。
②一段时间后，观察各组中口罩的腐烂程度。
③从口罩腐烂程度最大的一组上采集细菌样品，该样品即含有较强分解口罩能力的菌体。
（3）稀释涂布平板法可以用来分离纯化细菌，原因是当样品稀释度足够高时，每一个菌落
都来源于分散的单个细菌。从涂布平板后开始，每隔 6 小时统计一次平板上的菌落数，则随
着培养时间的延长，菌体数量先增加、达到最大值后稳定。如图所示：
（4）口罩被分解的部位将形成透明圈，菌落周围透明圈的面积与菌落面积比值最大，说明
该菌体的分解能力最强，所以选择 S/s 的比值最大（或 s/S 的比值最小）的菌落，就是能高
效降解一次性口罩的目的菌群。
【点睛】本题考查微生物的培养和筛选，意在考查考生对教材中所学知识能够灵活的迁移应
用。
[选修 1∶ 生物技术实践]
(广东省佛山市 2020-2021 学年高三上学期高中教学质量检测)21. 2，4-D 是一类广泛应用于
单子叶作物田间的除草剂，其过量施用会导致土壤污染。某研究小组采集土样，按下图所示
流程，从土壤中筛选 2，4-D 降解菌株，并获得了菌种。
回答下列问题∶
（1）该实验应从___________的土壤中采样。
（2）选择培养基中应添加 2，4-D 作为唯一碳源，选择培养的目的是___________。
（3）与选择培养基相比，用于划线纯化的培养基中还应适量添加___________（物质）。从
纯化结果判断土壤中含有多种 2，4-D 分解菌，判断依据是____________。
（4）现欲从多种 2，4-D 分解菌中筛选出 2，4-D 高效降解菌株，请完善以下实验思路;
①______________；
②将各组液体培养基放置在相同且适宜的条件下培养一段时间；
③____________。
【答案】 (1). 富含 2，4-D (2). 使能够分解 2，4-D 的微生物大量繁殖，不能分解 2，
4-D 的微生物不能生存 (3). 琼脂 (4). 菌落的形状、大小、颜色、隆起程度、光滑程
度等 (5). 将多种 2，4-D 分解菌，分别等量加入到相同浓度的 2，4-D 溶液中（已灭菌彻
底的 2，4-D 溶液，且此浓度可通过预实验锁定） (6). 分别测定每组 2，4-D 溶液中的 2，
4-D 残留量
【解析】
【分析】
1、从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选
菌株。
2、选择培养基是指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要
的种类在这种培养基上是不能生存的。
【详解】（1）筛选目的菌株，应该到相应的环境中取样，故该实验应从富含 2，4-D 的土壤
中采样。
（2）选择培养基中以 2，4-D 作为唯一碳源，选择培养的目的是使能够分解 2，4-D 的微生
物大量繁殖，不能分解 2，4-D 的微生物不能生存。
（3）选择培养基是液体培养基，划线纯化的培养基是固定培养基，故应该在划线培养基中
添加琼脂，可根据菌落的形状、大小、颜色、隆起程度、光滑程度等观察菌落，从而判断从
土壤中筛选出多种 2，4-D 分解菌。
（4）设计实验方案要遵循单因子变量原则、对照原则等，无关变量相同且适宜。欲从多种
2，4-D 分解菌中筛选出 2，4-D 高效降解菌株，可设计如下实验思路：
①将多种 2，4-D 分解菌，分别等量加入到某一相同浓度的 2，4-D 溶液中（已灭菌彻底的 2，
4-D 溶液，且此浓度可通过预实验锁定）；
②将各组液体培养基放置在相同且适宜的条件下培养一段时间；
③分别测定每组 2，4-D 溶液中的 2，4-D 残留量。
【点睛】本题主要考查微生物培养基的制作和目的微生物的筛选与分离，意在强化学生对相
关知识点的识记与理解。
(广东省梅州市兴宁市一中 2020-2021 学年高三上学期期末)21. 煤化工污水是一种含盐量较
高的难降解的工业废水。为了提高生化处理的效果，研究人员从煤化工企业生产污水中分离
出一株耐盐菌株，对耐盐菌进行初筛和复筛所用的培养基成分如下表。请回答下列问题：
葡萄糖 氯化铵 K2HPO4 MgSO4 NaCl 琼脂 无菌水
初筛培养基/
（g/L）
5 1 0．5 0．5 9．98 20 1000 mL
复筛培养基/
（g/L）
5 1 0．5 0．5 9．98 0 1000 mL
（1）要从煤化工企业生产污水中筛选耐盐菌的原因是_____。
（2）从培养基成分分析，培养基中加入的葡萄糖和氯化铵属于_____；将煤化工污水经富集
培养后接种到初筛培养基可用的方法是_____，初筛的目的是选择出耐盐效果较好的菌落；
和初筛培养基相比，复筛培养基从物理性质上划分属于_____培养基，复筛的目的除了进一
步筛选耐盐菌外，还能_____。
（3）某同学利用显微镜观察并统计了复筛后培养基中耐盐菌的数量，该方法统计微生物数
量时，与稀释涂布平板法相比，最大的缺陷在于_____。
【答案】 (1). 煤化工企业的污水中含盐量高，含有较多的耐盐菌 (2). 碳源、氮源
(3). 稀释涂布平板法 (4). 液体 (5). 增大耐盐菌的浓度（数量） (6). 将死菌和活
菌都统计在内，无法统计活菌的数量（或无法区分死活菌）
【解析】
【分析】
1、在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找；
2、稀释涂布平板法统计微生物数量时，有菌落是由多个细菌繁殖而来，会被实际数值偏小，
显微镜下计数会将死细胞一起计数，会比实际数值偏大。
【详解】（1）从煤化工企业的生产污水中筛选耐盐菌的原因是煤化工企业的污水中含盐量高，
含有较多的耐盐菌；
（2）培养基中加入葡萄糖的目的是为微生物生长提供碳源和能量，氯化铵属于氮源，初筛
培养基为固体培养基，将污水接种到固体培养基的方法是稀释涂布平板法或平板划线法，初
筛出耐盐效果较豪的菌落后，复筛培养基中未加入琼脂，因此属于液体培养基，液体培养基
可以使菌体与营养物质充分接触，有利于菌体的培养，使用液体培养基的目的是大量培养微
生物，增大微生物的浓度；
（3）用显微镜观察法统计微生物数量使用的工具是血细胞计数板，该访法统计微生物的不
足之处在于将死菌和活菌都统计在内，无法统计活菌的数量,导致统计结果偏大。
(吉林省长春市 2020-2021 学年高三上学期期末)11. 水果可以用来加工制作
果汁、果酒和果醋等。回答下列问题：
（1）制作果汁时，可以使用果胶酶、纤维素酶等提高水果的出汁率和澄清度。果胶酶是分
解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、________（答出 2 种即可）。纤维素酶可
以分解植物______________（填细胞膜或细胞壁）中的纤维素。
（2）用果胶酶处理果泥时，为了提高出汁率，需要控制反应的温度，原因是
__________________。
（3）现有甲乙丙三种不同来源的果胶酶，某同学拟在果泥用量、温度、pH 等所有条件都相
同的前提下比较这三种酶的活性。通常，酶活性的高低可用_____________来表示。
（4）获得的果汁（如苹果汁）可以用来制作果酒或者果醋，制作果酒需要__________________
菌，这一过程中也需要 O2，O2 的作用是__________________。制作果醋需要醋酸菌，醋酸
菌属于_____________（填好氧或厌氧）细菌。
【答案】 (1). 果胶分解酶、果胶酯酶 (2). 细胞壁 (3). 温度对果胶酶活性有影响，
在最适温度下酶活性最高，出汁率最高 (4). 在一定条件下，单位时间内、单位体积中反
应物的消耗量或者产物的增加量 (5). 酵母 (6). 促进有氧呼吸，使酵母菌大量繁殖
(7). 好氧
【解析】
【分析】
1、果胶是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物，不溶于水，在果汁加工中，果胶不
仅会影响出汁率，还会使果汁混浊。果胶酶能分解果胶，使榨取果汁变得更容易，也使得浑
浊的果汁变得澄清。果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解
酶和果胶酯酶等。
2、果酒的制作离不开酵母菌。酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧
呼吸，大量繁殖。在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
3、醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时才能进行旺盛的生理活动。当氧气、糖源都
充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将
乙醛变为醋酸。
【详解】（1）由分析可知，果胶酶包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等。植物
细胞壁由纤维素和果胶构成，故可用纤维素酶分解细胞壁。
（2）酶发挥催化作用需要适宜的温度和 pH 条件，在最适温度下，果胶酶的活性最高，出
汁率最高。
（3）酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力，酶活性的高低可以用在一定条件下，单位
时间内、单位体积中反应物的消耗量或者产物的增加量来表示。
（4）由分析可知，果酒的制作离不开酵母菌，在初期通入氧气，可以促进酵母菌的有氧呼
吸，使其大量繁殖；醋酸菌是一种好氧细菌。
【点睛】本题考查果酒、果醋的制作和果胶酶的相关内容，要求考生识记制作果酒、果醋的
原理，掌握果汁生产中果胶酶的作用，并结合题干信息解题。
(四川省成都市七中 2020-2021 学年高三上学期 1 月月考)11. 食用泡菜是四川人的传统饮食
习惯，在自贡几乎家家都备有泡菜坛子自制泡菜。请回答下列问题：
(1)制作泡菜时，所用盐水需煮沸，其目的是___________；在冷却后的盐水中加入少量陈泡
菜水是为了_______________
(2)泡菜腌制过程中若泡菜坛有沙眼，常导致腌制的蔬菜臭而不酸，其原因可能是
___________
(3)泡菜美味但却不宜多吃，因为在腌制泡菜的过程中，蔬菜中的硝酸盐会被微生物还原成_。
测定其含量的原理是：在盐酸酸化条件下，该物质和对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与 N
一 1 一萘基乙二胺盐酸盐结合形成_________________。
(4)某同学欲用新鲜的泡菜液分离纯化乳酸菌，应首先用_____________对泡菜液进行梯度稀
释，须进行梯度稀释的原因是____________________。
【答案】 (1). 杀灭微生物和去掉盐水中的溶氧 (2). 提供乳酸菌菌种 (3). 有氧条
件下乳酸菌不发酵，而其它杂菌繁殖后导致蔬菜腐败发臭 (4). 亚硝酸盐 (5). 玫瑰红
染料 (6). 无菌水 (7). 泡菜液中乳酸菌的浓度较高，直接培养很难分离到单个菌落
【解析】
【分析】
制作泡菜所用微生物是乳酸菌，实验原理为：乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸；利用
乳酸菌制作泡菜的过程中会引起亚硝酸盐的含量的变化；温度过高，食盐用量不足 10%、
腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加．一般在腌制 10 天后，亚硝酸
盐的含量开始下降；（3）测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基
苯磺酸发生重氮化反应后，与 N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与已知浓度
的标准显色液目测比较，估算泡菜中亚硝酸盐含量。
【详解】（1）制作泡菜时，所用盐水需煮沸，其目的是杀灭微生物和去掉盐水中的溶氧；在
冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液的目的是增加乳酸菌数量。
（2）乳酸菌是厌氧菌，若泡菜腌制过程中若泡菜坛有沙眼，导致氧气含量增加，有氧条件
下乳酸菌不发酵，而其它杂菌繁殖后导致蔬菜腐败发臭。
（3）蔬菜中的硝酸盐会被微生物还原成亚硝酸盐；亚硝酸盐的测定原理是：在盐酸酸化条
件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与 N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫
瑰红色染料。
（4）泡菜液中乳酸菌的浓度较高，直接培养很难分离到单个菌落，因此需要用无菌水对泡
菜液进行梯度稀释。
微信/支付宝扫码支付