生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定
一、 可溶性还原性糖的鉴定原理
生物组织中普遍存在的可溶性糖种类较多,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具有还原性的半缩醛羟基,因此叫做还原性糖;蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基,因此叫做非还原性糖,不具还原性。实际守丧本实验中,用斐林试剂只能检验生物组织中可溶性的还原性糖存在与否,而不能坚定可溶性的非还原性糖。斐林试剂由质量浓度为0.1g/mL氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡兰色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下,能够生成砖红色的Cu2O沉淀,而葡萄糖本身氧化成葡萄糖酸。其反应式如下:
CH2OH—(CHOH)4—CHO+2Cu(OH)2→
CH2OH—(CHOH)4—COOH+Cu2O↓+2H2O
用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:
浅兰色→棕色→砖红色↓
二、 蛋白质的鉴定原理
鉴定生物组织中是否含有蛋白质是常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂。双缩脲实际的成分是质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01g/mL的硫酸铜溶液。在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此,蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。
斐林试剂的配置
甲液 质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液
乙液 质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液
使用时临时配置,将45滴乙液滴入2mL甲液中,配置后立即使用。
苏丹Ⅲ溶液的配置
称取0.1g苏丹Ⅲ干粉,溶于100mL酒精的体积分数为95%溶液中,待全部溶解后再使用。
苏丹Ⅳ溶液的配置
称取0.1g苏丹Ⅳ干粉,溶于50mL丙酮中,再加入体积分数为70%的酒精50mL,充分混合后即可使用。
双缩脲试剂的配置
取10g氢氧化钠放入量筒只能感,加水至100mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配置成质量浓度为0.1g/mL的氢氧化纳溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂 A。
取1g硫酸铜放入量筒中,加水至100mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.01g/mL的硫酸铜溶液(兰色)。瓶口上塞上胶塞,贴上标签,写上试剂B。