2020北京期末高三生物分类汇总--选修1、3

1 202001 期末 分类汇总 选 1 海 14.下列高中生物学实验或实践活动中，无法达成目的的是 （ ） A.新鲜的葡萄汁中接种一定量的干酵母菌，发酵制作果酒 B.消毒后的转基因植物叶片接种到无菌培养基上，培养获得愈伤组织 C.煮沸冷却的盐水与预处理的蔬菜混合后装坛，用水封住坛口进行发酵 D.在含 DNA 的滤液中加入 2 mol/L 的 NaCl 溶液，去除杂质并析出 DNA 22.（10 分）为探究细菌间的相互作用，科研人员利用基因工程技术，对无法利用乳糖 的大肠杆菌进行改造。 （1）将乳糖酶基因转入大肠杆菌，获得营养菌（能利用乳糖）；将抗生素 CRO 降解酶 基因转入大肠杆菌，获得抗性菌。将得到的两种菌分别接种于__________培养基进行扩大培 养。 （2）将两种菌分别用__________进行一系列梯度稀释，然后用__________法单独接种 于加入含 CRO 并以乳糖为唯一碳源的培养基中， 培养一段时间后，培养皿中均未出现菌落， 推测两种菌___________（填“发生”或“未发生”）可遗传变异。若将两种菌混合接种，则 培养一段时间后，培养皿中有菌落长出，且同时含有两种菌，推测两种菌实现了“互利共 生”。 （3）为进一步探究上述现象的原因，科研人员设计了图 1 所示装置进行实验。 ①在接种了营养菌和抗性菌混合菌液的培养板左侧，加入含__________的培养基，培养 基可从左侧逐渐扩散到混合菌液培养板上。定期检测混合菌液培养板上两种菌的数量，得到 图 2 所示结果。2 ②0~10 h，营养菌的数量变化是__________。 ③10~45 h，营养菌和抗性菌的变化趋势是二者均显著增加并逐渐__________，其原因 是__________。 东 12.空气中的微生物在重力等作用下会有一定程度沉降。某生物兴趣小组欲利用平板培养基 测定教室内不同高度空气中微生物的分布情况。下列关于实验的叙述不正确的是 A.在配制培养基时必须添加琼脂等凝固剂成分 B.将平板培养基放置在教室相同地点的不同高度 C.本实验需要设置不开盖的平板培养基作为对照 D.菌落数在30-300之间的平板才可以用于计数 西 14．下列实验程序不正确的是 A． B． C． D． 15．用纸片扩散法测定某病原菌对各种抗生素敏感性的实验，是在某病原菌均匀分布的平板 上，铺设含有不同种抗生素的纸片后进行培养。图示为培养的结果，其中抑菌圈是在纸 片周围出现的透明区域。下列分析正确的是 A．在图示固体培养基上可用平板划线法或涂布法接种病原菌 B．未出现抑菌圈可能是病原菌与抗生素接触后发生抗性变异 C．形成的抑菌圈较小的原因可能是微生物对药物较敏感 D．不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响 顺 1. 17 传统发酵技术基于人们长期的生活经验，下列叙述正确的是 A．制作泡菜过程中需添加乳酸菌 B．获得单一产品且纯度高 C．无法精确调节发酵过程的条件 D．所用设备均需严格灭菌 2. 18 某寄宿制学校，一天内出现多名学生拉肚子现象，相关人员怀疑食堂早餐出现了问 题。需对早餐留样中菌的数目、大肠菌群（粪便污染指标）和致病菌（金黄色葡萄球菌、 沙门氏菌等）等进行检测，下列相关叙述正确的是 A．无需对采集样品的器械进行严格灭菌 B．采用平板划线法测定留样中菌的数目 C．只需涂布一个平板就可完成上述检测 D．可观察菌落特征来区分致病菌的种类 CD 朝 14．我们生活离不开微生物。醋酸杆菌可酿醋，毛霉可制作腐乳，酵母菌可酿酒。下列 离体细胞消毒、接种 愈伤组织 试管苗脱分化 再分化 胰蛋白酶动物组织 制备细胞悬液→原代培养→传代培养 挑选葡萄、冲洗、榨汁 果醋 果酒无氧发酵 有氧发酵 抑菌圈 含抗生素的纸片 蔬菜加工+泡菜盐水→加调料、装坛 泡菜无氧发酵3 有关三种微生物的叙述中正确的是 A．三者都可进行有氧呼吸和无氧呼吸并产生乳酸 B．三者都能发生基因突变、基因重组和染色体变异 C．三者合成蛋白质时，mRNA 都经核孔进入细胞质 D．三者在发酵过程中所需的最适温度有一定差异 石 16．儿茶素(C)是从茶叶中提取的一种天然多酚类化合物，有一定的抗菌作用，但作用较弱。 研究人员用稀土离子Yb3+对儿茶素(C)进行化学修饰，形成配合物Yb3+-C，并探究其抗 菌效果和机理。 （1）细菌的细胞膜以 为基本支架，儿茶素(C)与细胞膜的亲和力强，可 以穿过细胞膜。稀土离子Yb3+可与细菌内的某些酶发生竞争性结合而降低酶的活 性，也可水解磷酸二酯键进而损伤细菌的遗传物质 。但稀土离子与细胞的 亲和力较弱，难以到达作用靶点，影响了其抗菌活性。 （2）为了确定配合物中Yb3+：C的最佳摩尔比，研究人员利用 方法将金黄色 葡萄球菌接种到培养基上，培养基的成分应包括 、水、无机盐等。待培 养基布满菌落后，用不同摩尔比的Yb3+-C配合物处理滤纸片，将其置于培养基中 （见下图）一段时间后，比较滤纸片周围 的直径，结果显示Yb3+：C 的最佳摩尔比为 。 （3）将金黄色葡萄球菌制成菌悬液，分别加入等量的C、Yb3+和最佳摩尔比的Yb3+-C， 测定24h内金黄色葡萄球菌存活数量变化（A600值越大，细菌数量越多），结果见 下表。 时间 组别 A600 0h 2h 4h 8h 16h 24h 对照组 0.40 0.40 0.38 0.35 0.35 0.35 C处理 0.40 0.12 0.13 0.07 0.02 0.01 Yb3+处理 0.40 0.14 0.11 0.04 0.02 0.01 Yb3+-C处理 0.40 0.02 0.01 0.01 0.01 0.01 由此得出的结论是 。 （4）为探究配合物Yb3+-C 的抗菌机理，研究人利用透射电镜观察了各组金黄色葡萄球 菌细胞内的超微结构，结果如下图。 编号 Yb3+：C的摩尔比 1 1:1 2 1:2 3 1:3 4 1:4 5 1:54 结果显示： （a）未加抗菌剂：细菌菌体较小，其细胞质分布均匀； （b）C处理：细胞壁和细胞膜等结构不光滑，略显粗糙； （c）Yb3+ 处理：细胞质出现较明显的固缩及空泡化现象； （d）Yb3+-C 处理：细胞壁及细胞膜等结构发生破裂，细胞质出现了严重的 固缩及空泡化现象。 由此可见，儿茶素（C）和Yb3+作用的主要位点分别是 、 ，推测Yb3+ -C具有更强抗菌作用的机理是 。 16．（13 分） （1）脂双层（磷脂双分子层） DNA （2）稀释涂布平板 碳源、氮源（2 分） 抑菌圈（或透明圈） 1:4 （3）与 C、Yb3+相比， Yb3+-C 能有效缩短杀菌时间（2 分） （4）细胞壁和细胞膜（或细胞膜/细胞表面） 细胞质 儿茶素作用于细胞表面，使Yb3+ 更容易进入细胞内，破坏细胞结构，导致细胞死 亡 （2分） 丰 17.（12 分）餐厨垃圾废液中的淀粉、蛋白质、脂肪等微溶性物质可以被微生物分解并利 用，但由于初期有益微生物数量相对较少，存在发酵周期长、效率低等缺点，极易对环境造 成污染。 （1）为探究圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌处理某餐厨垃圾废液的最佳接种量比，来制备微生 物菌剂，研究者做了如下实验： ①将两种菌液进行不同配比分组处理如下表所示： 编号 R0 R1 R2 R3 圆褐固氮菌：巨大芽孢杆菌 1∶0 0∶1 1∶1 2∶1 将 上 表 菌 液 分 别 接 种 于 100mL______________ 中 进 行 震 荡 培 养 。 振 荡 处 理 的 目 的 是 __________________。本实验还需设置对照组为_________________。 ②培养 3 天后测定活菌数，取一定量菌液进行____________稀释，然后分别取 0.1mL 的菌 液采用___________法接种于基本培养基中进行培养。进行计数时，可依据_________对两种 菌进行区分，并选取菌落数在___________内的平板，实验结果如下图所示：5 由实验结果可知_____________________。 （2）为进一步探究菌种比例对该餐厨垃圾废液中蛋白质、脂肪等有机物的降解效果， 测得 15 天内废液中蛋白质、脂肪的含量变化如下图所示： 由实验结果可知分别选取___________的接种比对该餐厨垃圾废液中蛋白质、脂肪的降 解效果最好。废液中个别组蛋白质含量在后期升高，分析可能的原因是_________。 17.（12 分） （1）（1）①某餐厨垃圾废液 供氧、目的菌与培养液充分接触 接种等量无菌水 ② 梯度 涂布 菌落形态 30~300 两种菌混合接种时有效菌落数均大于单独接种；两菌种接种量比例为 1:1 时，废液中 2 种菌种的有效活菌数能够实现同步最大化（2 分） （2）R3 R1（2 分） 随着固氮菌和芽孢杆菌的大量繁殖其产生的蛋白酶及脂肪酶等 导致蛋白质含量增加 通 平 密 房 大 14.有些实验需要采取适宜的措施避免实验者受到伤害。下列措施哪项不是为了达成该目的 A．分离菠菜绿叶中的色素时，需用培养皿盖住盛有层析液的小烧杯 B．高压蒸汽灭菌结束以后，应在压力表的指针归零后再打开灭菌锅6 C．检测酒精产生时，向试管中缓慢滴加溶有重铬酸钾的浓硫酸溶液 D．观察洋葱根尖细胞的有丝分裂时，盐酸解离后用缓水流冲洗装片 选 3 海 13.以下关于试管动物和克隆动物的说法，正确的是 （ ） A.都需要胚胎移植技术 B.都是有性生殖的产物 C.都遵循孟德尔的遗传定律 D.都与母本的性状相同 15.新疆野生油菜（P1）具有低芥酸、抗病虫等特性，为了改 良甘蓝型油菜（P2），研究人员将两种植物的体细胞进行融合获得 了属间杂种 F1，然后加入 1 对引物进行 PCR 鉴定，结果如图所 示。下列叙述不正确的是 （ ） A.用纤维素酶和果胶酶处理亲本的体细胞 B.用电击可促进两个亲本的原生质体融合 C.引物能与 DNA 上多个不同位点结合 D.电泳结果表明 F1-1 具有 P1、P2 的全部遗传信息 20.（12 分）阅读下面的材料，完成（1）～（5）题。 科研人员建立了一种新的靶向基因敲除技术——TALEN 技术（原理见下图）。TALEN 技 术使用的基因敲除工具是由 DNA 识别域和核酸内切酶两个部分组成的蛋白质。科学家发现 了一种细菌蛋白质（TALE），它的二连氨基酸（NI、NG、HD、NN，其中字母 N、I、G、H、D 分别代表了一种氨基酸）与四种碱基（A、G、C、T）有恒定的对应关系：NI 识别 A，NG 识 别 T，HD 识别 C，NN 识别 G。FokⅠ是一种形成二聚体后具有核酸内切酶活性的蛋白单体。 因此，可以利用 TALE 作为 DNA 识别域，用 FokⅠ二聚体定点切断 DNA。 科学家发现水稻植株无论是否具有光周期敏感蛋白基因 P，在短日照条件下均表现为雄 性可育。在长日照条件下，具有光周期敏感蛋白的水稻才能雄性可育。基因 P 只在单倍体花 粉细胞中表达，使其能够合成淀粉。科研人员使用 TALEN 技术对水稻基因 P 进行靶向敲除， 以得到光敏雄性不育水稻新品种。 （1）在 TALEN 技术的设计中，选择使用 FokⅠ单体而不直接使用 FokⅠ二聚体，这样能 减少对 DNA 的__________切割，保证了基因敲除的靶向性。为了让 TALEN 技术能用于各种 不同生物、不同基因的敲除，没有与 TALE 蛋白结合的 FokⅠ二聚体对 DNA 的切割应 __________（选填“具有”或“不具有”）类似于限制酶的“限制 性”。 （2）若 TALE 蛋白左臂所识别的基因 P 的序列为“-TGACC-” ， 则 TALE 蛋白左臂对应的二连氨基酸序列应为__________。用这 种方法，可以确定 TALE 蛋白的氨基酸序列，进而人工合成 TALE 蛋白基因。然后将 TALE 蛋白基因与__________基因进行融合，7 得到融合基因。 （3）科研人员用图 2 所示的质粒为载体，其中的潮霉素抗性作为标记基因，作用是 __________。应选用__________酶将该质粒与融合基因构建为重组质粒，并将融合基因设法 导入到水稻愈伤组织中，再利用__________技术获得 T0 代植株。 （4）由于基因靶向敲除成功的概率比较低，所以科研人员培育 T 0 代植株时应保证 __________日照条件，待其自花受粉得到 T1 代，再将 T1 代植株__________，并在开花期随 机选择一部分植株的花粉进行鉴定，鉴定方法是__________。若观察到某植株的花粉全部未 被染成蓝色，则该植株为所需的纯合光敏雄性不育新品种。 （5）与传统的雄性不育水稻品种相比，光敏雄性不育新品种的优势在于它能实现自交 繁殖并保留雄性不育特性，这是因为__________。 21.（9 分）科研人员在杂交瘤细胞的基础上，获得了双杂交瘤细胞，能够产生双特异性 抗体，该抗体可以同时结合两种抗原。 （1）科研人员将抗原 α、β 分别注射到小鼠体内，引起机体的__________免疫， __________分泌相应抗体。 （2）科研人员获得上述小鼠的脾脏细胞，制备两种杂交瘤细胞。每种杂交瘤细胞产生 的抗体结构、与抗原结合的情况如图 1 所示。 ①制备杂交瘤细胞时，需将上述小鼠的脾脏组织，用__________处理获得单细胞后，再 与小鼠的骨髓瘤细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞。将两种杂交瘤细胞用__________试剂 处理促进其融合，在培养基中加入__________（天然成分）培养。如果两种细胞成功融合， 则会同时表达出抗体的重链 A、B 和轻链 a、b，这种细胞称作双杂交瘤细胞。 ②抗体由两条重链和两条轻链组成，重链和轻链均分为恒定区和可变区，两条重链依赖 于 A1 或 B1 进行组装（A1 与 B1 相同），重链与轻链的组装依赖于恒定区 A2、a 或 B2、b（a 与 b 相同）。因此，双杂交瘤细胞产生的抗体种类较多，其中有一种抗体能同时与抗原 α、β 结合称为双特异性抗体，如图 2。请将 A1、A2、B1、B2、a、b、α、β 等字符填入下面的表 格中。 ③为使双杂交瘤细胞只产生图 2 所示双特异性抗体，降低纯化分离成本，科研人员对重 链、轻链的结构进行改造。改造思路是在 A、B、a、b 的恒定区通过改变__________，进而 改变蛋白质的空间结构，实现“榫卯”式互补组装的唯一性，这种改造属于现代生物技术中的 __________工程。 （3）结合双特异性抗体特点，请分析其在肿瘤治疗方面的应用前景：________。 东13. 利用植物体细胞杂交获得优良新品种过程中，不需要进行的是 1 2 3 4 5 6 A2 α8 A. 去除亲本体细胞的细胞壁 B.选择具有优良性状的亲本 C.利用灭活的病毒诱导原生质体融合 D.诱导杂种细胞愈伤组织的再分化 14. B基因存在于水稻基因组中，仅在体细胞和精子中正常表达，在卵细胞中不转录。为研 究B基因表达对卵细胞的影响，设计了如下实验来获取能够在卵细胞中表达B基因的转基因植 株。 注：启动子﹡指可在水稻卵细胞中启动转录的启动子； Luc基因表达的荧光素酶能催化荧光素产生荧光 下列关于该实验的叙述，不正确的是 A. B基因在水稻卵细胞中不转录，可能是B基因的启动子在卵细胞中无法启动转录 B. 可从水稻体细胞和精子中提取RNA构建的cDNA文库中获得B基因中编码蛋白的序列 C. 过程②在培养基中应加入卡那霉素以检测T-DNA是否整合到水稻细胞染色体DNA上 D. 在鉴定和筛选转基因植株时，可以检测加入荧光素的该植株卵细胞中是否发出荧光 西 21．（12 分） 地中海贫血症是一种在我国长江以南各省高发的单基因遗传病，发病原因是由于珠蛋白 合成异常导致红细胞易破裂发生溶血。 （1）某地区的地中海贫血症患者的 β 珠蛋白基因出现图 1 所示变化，该突变将导致 ， 使其无法与α珠蛋白结合，导致α珠蛋白在细胞中相对过剩，沉积在红细胞中造成细胞 被破坏，因而出现贫血病症。 （2）地中海贫血症患者除了需要输血缓解症状之外，常见的治疗手段是进行异体骨髓移植， 它的局限性主要是 。目前利用生物工程技术将患者的体细胞转化为多能干细 胞，以获得用于自体移植的细胞。 （3）研究者利用慢病毒载体建立相应转化系统，对上述多能干细胞进行基因修复。具体操 作过程如图 2 所示。 图 2 目的基因 酶切 载体 表达 载体 表达 载体 包装载体 包装细胞 慢病毒 导入 多能干细胞 I-慢病毒载体构建 II-慢病毒包装 III-稳转细胞株建立 转染 适宜条件下培养 1 2 3 目的基因 正常人碱基序列：GTT CTT TGA 图 1 β 珠蛋白基因 β-地中海贫血患者碱基序列：GTT GA9 ①I：表达载体含 HIV 病毒逆转录形成的 cDNA 片段，该片段帮助外源基因整合到 上，使外源基因稳定表达。为达到纠正患者 α 珠蛋白与 β 珠蛋白的比例异常 的问题，需要构建两种表达载体，分别以 和 α 珠蛋白干扰基因作为目的基因。 ②II：需要将 （选择下列序号填写）导入包装细胞，一段时间后可以获得能够 转化患者多能干细胞的慢病毒颗粒。 a.包装载体 b.表达载体 ③III：为了便于筛选出成功转化的多能干细胞，其中 （选择下列序号填写）含 有易检测的标记基因。 a.包装载体 b.表达载体 （4）理论上在获得成功转化的多能干细胞后，需要诱导其定向分化为 ，然后植入 患者骨髓，检测 以确认此技术可应用于地中海贫血症的治疗。 （5）本项研究目前仅在动物实验中完成，尚未进行人体临床实验。请分析整个研究过程， 你认为进行人体临床试验可能存在的风险有哪些？请写出其中 1 个风险。10 21．（12 分） （1）β 珠蛋白空间结构发生变化（2 分） （2）发生免疫排斥（1 分） （3）①宿主细胞（受体细胞、干细胞）染色体 DNA（1 分） 正常的 β 珠蛋白基因（1 分） ②ab（2 分） ③b（1 分） （4）造血干细胞（2 分） α珠蛋白与β珠蛋白的比例（1 分） （5）慢病毒转化细胞时可能引起影响宿主正常基因功能；经过基因修复的多能干细胞有癌 变可能；病毒的部分序列表达产物或经过改造的多能干细胞都可能引发强烈的免疫反 应（答出其中一项即可，合理即给分）（1 分） 顺 3. 19 下图是“白菜-甘蓝”杂种植株的培育过程，下列叙述不正确的是 A．①过程用的酶由植物细胞分泌 B．③④过程表达的基因有差异 C．②过程的基础是细胞膜流动性 D．培育出的杂种植物为四倍体 4. 20 细胞毒素可有效杀伤肿瘤细胞，但没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康 细胞造成伤害。下图示特异性杀死肿瘤细胞的过程，图中抗体是利用单克隆抗体技术制 备的。下列叙述不正确的是11 A．抗体制备需用细胞融合技术 B．细胞毒素识别肿瘤细胞膜上的糖蛋白 C．溶酶体破裂加速肿瘤细胞凋亡 D．抗体可使细胞毒素进行特异性的杀伤 5. （10 分）科研人员发现在人类肿瘤细胞中 LMNA 基因表达异常，LMNA 基因编码人体 A 型 和 C 型核纤层蛋白，核纤层蛋白与维持细胞核正常形态有关。科研人员利用 CRISPR/Cas9 技 术对体外培养的 HepG2（人源肺癌细胞）细胞株进行基因编辑，获得了 LMNA 基因敲除的稳 定细胞系。实验过程如下。 （1）Cas9 是一种核酸内切酶，它与 sgRNA 构成的复合体能与 DNA 分子特定碱基序列结合， 如图 1。作用原理是 sgRNA 与 DNA 单链进行____________，并在 PAM 序列（几乎存在于所有 基因中）上游切断 DNA 双链。Cas9 来自细菌， HepG2 细胞中没有编码 Cas9 的基因，需将 Cas9 基因及双链 sgRNA 拼接后形成________与质粒结合，导入 HepG2 细胞。 （2）用图 2 质粒以及含 Cas9-sgRNA 拼接基因的 DNA 片段（其上有三个酶切位点）构建表达 载体，应选用__________进行酶切。将构建好的表达载体与感受态细菌置于适宜反应体系中 培养。然后将培养的细菌涂布于含__________的平板培养基上，37℃培养，24h 后挑取菌落， 提取质粒作为模板，选择图 3 中引物组合__________________，通过 PCR 和电泳技术鉴定是 否重组成功。 （3）用鉴定成功的工程菌对 HepG2 细胞进行转染，培养三天后收集 HepG2 细胞，从分子水 平和细胞水平检测导入是否成功。 图 1 图 2 图 312 ①提取 HepG2 细胞的基因组，对 DNA 分子的 进行检测。 ②请写出细胞水平的两项检测指标____ __ __。 （4）经多种检测，科研人员发现成功敲除了 HepG2 细胞的 LMNA 基因，并获得了稳定遗传的 细胞系。请围绕该细胞系的科研价值和治疗癌症的价值等方面提出一个可研究的问题 __________________________。 AB 5.（10 分） （1）碱基互补配对（1 分） 目的基因（或拼接基因）（1 分） （2）EcoRI（1 分） 嘌呤霉素（2 分） I 和 III（1 分） （3）①碱基序列（1 分） ②HepG2 细胞的细胞核形态、单位时间内细胞数目的增长量等（合理即可）（2 分） （4）探究 LMNA 基因敲除后 HepG2 细胞功能改变的机制；探究 LMNA 基因突变对细胞生长速 率的影响机制（1 分） 朝期中 14．为增强玉米抗旱性，研究者构建含有某微生物抗旱基因 E 的重组质粒，用农杆 菌转化法转入玉米幼胚组织细胞中，获得抗旱的转基因玉米。下列相关叙述不正确的是 A．提取该微生物 mRNA 反转录为 cDNA，通过 PCR 可获得大量目的基因 B．将重组质粒置于经 CaCl2 处理的农杆菌悬液中，可以获得转化的农杆菌 C．用农杆菌转化法将 E 基因转入玉米幼胚组织细胞需要严格进行无菌操作 D．用 E 蛋白的抗体进行抗原-抗体杂交，可在个体水平检测转基因玉米的抗旱性状 15. 驱蚊草含有香茅醛，能散发出一种特殊的柠檬型香气，从而达到驱蚊且对人体无害的效 果。驱蚊草是把天竺葵的原生质体和香茅草的原生质体进行诱导融合培育而成的。下列 关于驱蚊草培育的叙述，错误的是 A. 驱蚊草的培育属于细胞工程育种，优点是克服了远缘杂交不亲和的障碍 B. 驱蚊草培育过程要用到纤维素酶、果胶酶、PEG 等试剂或电刺激等方法 C. 驱蚊草培育过程不同于植物组织培养，无细胞脱分化和再分化的过程 D. 驱蚊草培育利用了植物体细胞杂交技术，育种原理是染色体数目变异 期末 15．某研究所将拟南芥的三个抗盐基因 SOS1、SOS2、SOS3 导入玉米，筛选出成功整 合的耐盐植株（三个基因都表达才表现为高耐盐性状）。如图表示三个基因随机整合的 情况，让三株转基因植株自交（无交叉互换），后代高耐盐性状的个体比例最小的是 A．甲 B．乙 C．丙 D．三者相同 石 13．下列关于基因工程的叙述，正确的是 A．通常用不同的限制性核酸内切酶处理含目的基因的DNA和运载体 B．细菌质粒、动植物病毒等是基因工程常用的运载体 C．培育抗除草剂的作物新品种，导入目的基因时只能以受精卵为受体13 D．可用DNA分子杂交技术检测目的基因是否成功表达 14．下列关于高中生物学实验的叙述不正确的是 A．探究酶的专一性时，自变量可以是酶的种类或不同的底物 B．可以采用构建物理模型的方法研究 DNA 分子的结构特点 C．色素提取实验中，研磨叶片时应加入碳酸钙以防止色素被破坏 D．龙胆紫溶液染色后，洋葱根尖的质壁分离现象更容易观察 15．下列关于单克隆抗体制备的说法，正确的是 A．将特定抗原注射到小鼠体内，可以从小鼠血清中获得单克隆抗体 B．经特定抗原免疫后的 B 淋巴细胞在体外培养时可分泌单克隆抗体 C．诱导 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后，发生融合的细胞均为杂交瘤细胞 D．筛选出杂交瘤细胞后，需利用特定抗原再次筛选分泌单克隆抗体的细胞 18．内皮祖细胞能分化为血管内皮细胞，促进血管新生，其损伤会导致严重的心血管疾病。 为探究黄芪多糖（APS）对内皮组细胞的保护作用，进行了以下实验。 （1）从血液中直接分离获得内皮祖细胞，在 37℃恒温培养箱中进行培养，通入的空气应 含 以维持 pH 稳定。 （2）实验分组及处理 第 1 组：在 EGM-2 培养液中培养 48h。 第 2 组：在 EGM-2 培养液中培养 24h 后，再加入 1mg/mL 脂多糖（LPS）继续培养 24h。（加入 LPS 的目的是诱导内皮祖细胞的损伤） 第 3 组：在 EGM-2 培养液中加入 0.8mg/mL APS 培养 24h 后，加入 继续培养 24h。 （3）细胞增殖能力检测 将上述处理好的各组细胞分别接种在多孔板中继续培养，测定 96h 内细胞数量的变 化。（用 OD 值表示，数值越大表示细胞数量越多） 时间 组别 OD 值 0h 24h 48h 96h 1 0.61 0.85 1.55 2.02 2 0.67 0.72 1.31 1.65 3 0.52 0.81 1.50 1.79 据此得出的结论是 。 （4）miRNA 检测 miRNA 与靶基因 mRNA 配对导致 mRNA 无法参与 过程，从而实现对靶基因 表达的调控。研究人员提取细胞中的总 RNA，在 酶的作用下合成 cDNA， 然后进行定量 PCR，计算各种 miRNA 的含量，结果如下图所示： 14 推测 LPS 引起细胞损伤的原因是 。APS 在一定程度上能减轻这种损伤。 21．环境 DNA(eDNA)技术是指从环境中提取 DNA 片段，结合 PCR 和 DNA 测序等分子生 物学技术来定性或定量检测目标生物，从而确定其分布状况等，是一种新型生物资源调 查手段。科研人员利用 eDNA 技术对某段长江流域的江豚分布进行了调查。 （1）江豚是我国现存的唯一水生哺乳动物，国家一级濒危物种，不宜用传统的 法 进行种群数量调查。江豚在生态系统中属于 。 （2）水样中提取的 eDNA 来源很丰富，可能来自水中动植物死亡后的组织细胞及各种 排泄物，以及水中的 ，甚至可能来自陆生动植物遗留在水中或由于人类活 动进入到水体中的 DNA。 （3）设置 10 个检测点，采集水样并提取 。检测点包括观测到江豚出现的水域， 以及未观测到但适宜江豚生存的水域（疑似点）。 （4）eDNA 分析 首先根据江豚线粒体的特有基因设计 ，然后进行荧光定量 PCR。每一个 循环包括 、复性和延伸三步，需要的酶是 。每个 DNA 样品重 复测定 3 次。结果如下表所示： 注：“-”表示未检出。 测定结果显示，观测到江豚的 4 个水域结果都呈阳性，其他 6 个疑似点中 的检 测结果也呈阳性，说明这些疑似点也是江豚活动的水域。 （5）eDNA 技术具有高灵敏、低成本、无损伤、快捷方便等优点，应用前景广泛，但不能 用于 。　　　　　　　　 A．物种多样性的研究 B．某种鱼类的食性分析 C．濒危物种的调查 D．准确判断物种的实时存在情况　 （6）目前鱼类资源的减少被认为是造成长江江豚数量下降的主要原因之一。研究者用 eDNA 技术测定了该流域内浮游动物的生物量，可进一步根据营养级之间的 估算 出鱼类资源量，进而评价该流域江豚的生存状况。 BDD 检测点 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 观测到的江豚 数量（头） 0 0 0 2 0 0 8 3 2 0 eDNA 平 均 浓 度（拷贝数/升） - 14996 5194 2820 - - 35588 3027 1105 -15 18．（10 分） （1）5%CO2（2 分） （2）1mg/mL LPS（2 分） （3）APS 对内皮祖细胞有一定的保护作用（2 分） （4）翻译 逆转录 LPS 导致细胞中 miRNA-146a 含量升高，抑制了部分基因的表达，miRNA-424 和 miRNA-145 含量降低，解除了对另一部分基因表达的抑制（2 分） 21．（12 分） （1）标志重捕（2 分） 消费者 （2）微生物 （3）eDNA （4）特异性引物 变性（解链） 耐热的 DNA 聚合酶（Taq 聚合酶或热稳定 DNA 聚合酶） S2、S3 （5）D （6）能量传递效率（2 分） 丰 12. 缺乏维生素 a 就容易导致夜盲症，营养不良，甚至有一些能够威胁到生命。而β-胡萝 卜素可以在人体内转化成维生素 a，科学家尝试通过转基因技术生产富含β-胡萝卜素的大 米。八氢番茄红素合酶(其基因用 psy 表示)和胡萝卜素脱饱和酶(其基因用 crtl 表示)参与β- 胡萝卜素的合成。依据以上信息分析正确的是 A. 重组质粒中的目的基因含有 psy 基因和 crtl 基因 B. 构建重组质粒需要限制酶、DNA 连接酶和核酸酶 C .可通过显微注射法将目的基因导入水稻受体细胞 D. PCR 既可扩增特定的基因也可检测目的基因表达 13. 图 1 为某森林生态系统部分生物关系示意图，图 2 为该生态系统中第二和第三营养级（ 甲、乙）的能量流动示意图，其中 a~e 表示能量值，下列有关叙述正确的是 A. 杂食性鸟位于第三和第四营养级 B. 该生态系统的分解者为大型真菌 C. 乙粪便中食物残渣的能量在 d 中 D. a+c 表示甲生长发育和繁殖的能量 14. 茎尖超低温疗法是一种马铃薯脱毒方法。科学家以单病毒 PLRV（马铃薯卷叶病毒）、PVS （马铃薯 S 病毒）感染的马铃薯试管苗为实验材料，对不同大小的茎尖超低温处理后，再生 培养。选取培养 18 周的 20 棵植株进行检测以获得病毒保存率，实验结果如下表 病毒感染类型 茎尖大小（mm） 病毒保存率（％） 0.5 0（0/20）PLRV 1.5 35（7/20） 0.5 100（20/20） PVS 1.5 100（20/20） 注：括号内数字表示检测阳性样本/检测总样本量 图 2图 116 结合以上实验结果，下列分析不正确的是 A. 超低温处理后的再生培养利用了植物组织培养技术 B. 可以利用 PCR 技术检测马铃薯植株中的病毒保存率 C. 1.5 mm 茎尖的超低温脱毒效果优于 0.5mm 的茎尖 D. 应设置一组未受病毒感染的马铃薯试管苗作对照组 15.下表为不同动物受精卵发育成胚胎进入子宫的时间（小时），依据下表分析不正确的是 发育阶段 发育时间 动物种类 2 细胞 4 细胞 8 细胞 16 细胞 桑椹胚 进入子宫时 受精卵的发 育天数（天） 小鼠 24～38 38～50 50～60 60～70 68～80 3 牛 27～42 44～65 46～90 96～120 120～144 4～5 马 24 30～36 50～60 72 98～106 6 A. 小鼠胚胎进入子宫时的发育程度比牛的高 B. 体外马胚胎移植到子宫时选择 16 细胞阶段 C. 受精卵发育的阶段顺序为 2-4-8-16-桑椹胚 D. 2-4-8-16 细胞发育阶段进行的是有丝分裂 21. (14 分） 神经纤毛蛋白-1 ( NRP-1） 是血管内皮生长因子的新型受体， 通过参 与 多种信号转导来促进肿瘤血管的生成。 本研究将为 NRP-1 单克隆抗体靶向治疗乳 腺癌 提供数据基础。 (1） 取乳腺癌 (MCF7） 组织块， 运用 技术获得 MCF7 细胞用于后续实验。 用重组的人 蛋白对小鼠进行注射， 使小鼠产生免疫反应， 制备杂交 瘤细胞， 将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养， 吸取培养孔中的 ( 填 “ 上清液” 或 “ 沉淀细胞” ）， 应用 技术进行抗体阳性检测。 经多次筛选和细胞培养， 获得 NRP-1 单克隆抗体 ( NRP-1 MAb） 。 （2）提取正常组织细胞和 MCF7 细胞的总蛋白，设置空白对照，加入 NRP-1 MAb 进行 蛋白质免疫印迹，实验结果如下： 该实验结果说明了_______。 （3）将 MCF7 细胞制成单细胞悬液，等量注入 4 组裸鼠右前腋下，接种后 3 天开始给药， 共给药 7 次。每隔 5 天测算一次肿瘤的肿瘤体积，如下图所示。 肿瘤体积（mm 3 ） 空白对照 正常组织细胞 MCF7 细胞17 对照组注射________，从上图中可以看出________。 （4）结合题干信息，综合以上研究请你推测NRP-1 MAb抑制肿瘤的作用机理是________。 （5）注射不同剂量 NRP-1 MAb 33 天后，剥离肿瘤组织称重，实验结果如下图： 从该结果中可以看出________。综合比较（3）（5）的实验结果，可见中高剂量和低剂 量的 NRP-1 MAb 在降低肿瘤体积和降低肿瘤重量上出现了不一致性。 （6）基于以上研究，科学家们对该抗体的用药方式有两种观点：谨慎用药和适宜浓度用药。 你支持哪个观点，并说出理由。 21.（14 分） （1）动物细胞培养技术 神经纤毛蛋白-1（NRP-1） 上清液 抗原—抗体杂交技术 （2）NRP-1 在 MMCF7 细胞中高表达 （3）等量的生理盐水 NRP-1 MAb 能够有效地降低肿瘤的体积，中、高浓度抗体的降低效果比低浓度的效果 更显著。（2 分） NRP-1 在 MMCF7 细胞中高表达，NRP-1 MAb 与 NRP-1 特异性结合，阻断了血管内皮生 长因子与 NRP-1 的结合，抑制了肿瘤血管生成，进而降低了肿瘤的体积。（2 分） （4）从该结果可知低中高剂量的 NRP-1 MAb 都可以明显降低肿瘤组织的重量，中、高浓 度抗体的降低效果稍微没有低浓度的好，这种差异并不显著。（2 分） （5）支持谨慎用药 理由：随着治疗时间的延长，这种不一致性可能会加大，应进行后 续研究，现阶段谨慎用药。 支持适宜浓度用药 理由：该抗体已经显示了显著的抑瘤效果，这种不一致性很小，可 以考虑适宜浓度用药。（2 分）(合理给分) 通 12.长春花中的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。科研人员利用 TMS 基因构建重组 Ti 质粒，对 肿瘤重量（g） 时间（天） 肿瘤重量（g）18 愈伤组织进行遗传改造，从其细胞分泌物中提取长春碱,解决长春碱供不应求的问题，操作 流程如下图。下列说法错误的是 A. 过程②多采用农杆菌转化法 B. Ti 质粒是 TMS 基因的运载工具 C. 外植体通过①脱分化过程形成愈伤组织 D. 愈伤组织通过③再分化过程产生长春碱 13.若在固体培养基上用稀释涂布法培养细菌，看到的结果不可能是 14.线粒体中的琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸脱氢，脱下的氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲 烯白。丙二酸与琥珀酸结构相似，可与琥珀酸脱氢酶结合，但不会脱氢。为探究丙二酸对琥 珀酸脱氢反应是否有抑制作用，进行实验设计。下列叙述不合理的是 A．实验假设：丙二酸对琥珀酸脱氢反应有抑制作用 B．实验取材：大白鼠心肌细胞含有较多线粒体，可从其研磨液中提取琥珀酸脱氢酶 C．实验分组：对照组加琥珀酸、实验组加丙二酸，两组都加甲烯蓝和琥珀酸脱氢酶 D．观察指标：蓝色甲烯蓝还原成无色甲烯白时间的长短 21.（10 分）《海南日报》报道, 黄粉虫幼虫喜食麦麸,在国内常被用作饲养鱼、鸟、家禽的 饲料。然而，三亚市南繁科学技术研究院在饲养黄粉虫幼虫的过程中，发现这小小的虫子具 有一项神奇功能--将塑料转化为有机肥,包括塑料中最难降解的聚苯乙烯(俗称泡沫塑料)。 请结合报道完成下列学习任务。 （1）简要写出“探究聚苯乙烯能否为黄粉虫幼虫的生长发育提供能量”实验设计思路。 （2）研究发现, 黄粉虫幼虫能利用塑料是其肠道中共生的微生物的作用。描述从黄粉虫幼 虫肠道中分离聚苯乙烯分解菌的基本操作过程。 （3）结合实际生活经验，从环保角度谈防治塑料废弃物污染的具体对策(至少三条)。 DDC 21.（1）参考样例: ①取一定量黄粉虫幼虫，随机均分为两组。 ②对照组：喂食适量的麦麸；实验组：喂食等量的聚苯乙烯；适宜条件下培养。 ③定期测定并记录两组黄粉虫幼虫的生长、发育和繁殖情况。（3 分,错误观点扣分, 分级赋分）19 （2）参考样例: 取样：取黄粉虫幼虫肠道组织研磨，溶解于无菌水制成悬浮液； 制备选择培养基：配制以聚苯乙烯为唯一碳源的培养基； (梯度稀释：样液无菌水进行梯度稀释) 分离纯化：用平板划线（或稀释涂布平板法）法接种于进行选择培养培养； 培养：适宜环境下培养。（5 分, 错误观点扣分,分级赋分） （3）参考样例: 减少塑料袋、外卖食品的塑料包装使用；开发新材质的包装材料；筛选和培养微生物降 解塑料；垃圾分类处理；颁布行政法规等。（2 分,从环保角度谈防和治具体措施,错误观点 扣分,分级赋分） 平 密 房 大 15.下列有关微生物培养的叙述正确的是 A.常使用液体培养基分离获得细菌单菌落 B.应该在灭菌操作以后调节培养基的 pH C.用显微镜直接计数固体培养基中微生物数量 D.倒置平板可防止培养基被滴落的冷凝水污染 19.（13 分）为使水稻获得抗除草剂性状，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入水稻植株， 获得抗草甘膦转基因水稻。20 注：GUS 基因表达产物经染色能从无色变成蓝色 （1）将草甘膦抗性基因作为 ，与 Ti 质粒用相同的 和 DNA 连接酶处理构建基 因表达载体。 （2）用 处理农杆菌后获得感受态细胞，将其与基因表达载体混合完成转化后，在 添加 的培养基中，经筛选 1 得到含基因表达载体的农杆菌。 （3）取某品种水稻的幼胚，先进行_______处理，然后接种到培养基中，水稻幼胚细胞发生 ___________形成愈伤组织。用含基因表达载体的农杆菌侵染该愈伤组织。 （4）利用 PCR 技术，可以鉴定被侵染的愈伤组织中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性 基因的部分序列如下： 5’---ATGGCT………AGGAAC---3’ 3’---TACCGA………TCCTTG---5’ 根据上述序列应选择引物 （填字母）进行 PCR。 A.引物：5’-TACCGA-3’ B.引物：5’-GTTCCT-3’ C.引物：5’-AUGGCU-3’ D.引物：5’-ATGGCT-3’ （5）除了鉴定愈伤组织中是否含有目的基因以外，还可以利用 GUS 基因表达产物的鉴定进 行图中的筛选 2，以确定目的基因是否 。两次筛选后得到的转基因愈伤组织经过细胞 的 过程，获得转基因水稻。 （6）为获得具有抗除草剂性状的转基因水稻，还需要在个体水平进行抗性测试。请你设计 一个实验方案，筛选出对草甘膦具有抗性的转基因水稻。 19.（13 分） （1）目的基因 限制性核酸内切酶 （2）CaCL2 潮霉素 （3）消毒 脱分化 （4）B D （5）表达 再分化 （6）选取长势相同的野生型和转基因水稻（1 分）； 用等量相同浓度的草甘膦农药喷洒（1 分）；21 相同环境条件下培养一段时间后（1 分）； 观测水稻的生长情况（1 分）。（共 4 分） 综合 海 东 西 顺 朝 石 丰 通 平 密 房 昌 1. 14 下图为细胞分裂素与植物体内营养物质分布的关系研究实验图示，有关叙述不正确 的是： A．植物组织培养除需营养外还需适宜浓度和比例的激素 B．细胞分裂素/生长素比值接近 1 时利于外植体的再分化 C．细胞分裂素/生长素比值显著低于 1 时利于愈伤组织再分化形成根 D．细胞分裂素/生长素比值显著高于 1 时利于愈伤组织再分化形成芽 2. 15 有关“转基因猴”、“克隆猴”和“试管猴”的说法合理的是 A．三种猴都继承了双亲的优良性状 B．三种猴培育过程都体现了细胞核的全能性 C．三种猴培育过程都应用了动物细胞培养技术和胚胎移植技术 D．为提高繁殖效率三者都可采用原肠胚期的胚胎进行胚胎分割 3. 16（13 分）吴茱萸是一种中药，其主要成分为吴茱萸碱（EVO）。为研究 EVO 对人胃22 癌细胞增殖的影响及作用机制，科研人员做了以下实验。请回答问题： (1) 检测 EVO 对胃癌细胞 BGC-823 增殖的影响。 ①用含动物血清的 DME/F-12 培养基置于恒温培养箱中培养 BGC-823，动物血清 的作用是______。 ②取出上述培养的细胞，加入胰蛋白酶制成______细胞悬液，置于加入不同浓度 EVO 的多孔板中进行培养。 ③EVO 对 BGC-823 细胞增殖影响的实验结果如图 1。 图 1 实验结果表明______。 (2) 检测 EVO 对 BGC-823 细胞周期的影响，结果如下表。 细胞周期中各期的细胞比例 组别 G0/G1 期（%） S 期（%） G2/M 期（%） 对照组 42.62 17.65 23.37 EVO 组 8.57 19.30 54.13 据表可知，EVO 能诱导细胞周期阻滞于______期。 (3) 检测 EVO 对 BGC-823 细胞周期和细胞凋亡相关蛋白表达的影响，结果如图 2。 图 2 ①根据上述实验，可判断______是细胞周期抑制蛋白，该蛋白能与细胞周期蛋白基 因的启动子结合，抑制其______，从而抑制 BGC-823 细胞周期的运行。 ②细胞凋亡蛋白 Caspase-3 表达量______，该蛋白参与细胞的______死亡过程。 (4) 综上所述，推测 EVO 对人胃癌细胞的作用机制是______。 4. 21（10 分）近年来，在处理富营养化水体的污水过程中，与化学、物理除氮方法比较， 目前认为微生物反硝化去除氮素污染更为经济有效。科研工作者采用基因工程技术构建 具有定向高效降解含氮化合物能力的工程菌，进行了相关研究。请回答问题。 (1) 微生物的反硝化作用，是氮循环中一个重要的生物过程。亚硝酸盐还原酶（Nir） 是该过程的关键酶，是由野生菌株 YP4 的反硝化基因（nirS）转录后，再翻译出具 有_____作用的蛋白质。 (2) 工程菌的构建 ①研究者利用 NCBI 数据库查到 nirS 基因的碱基序列，设计引物，利用 PCR 技术 扩增 nirS 基因。PCR 技术利用了_____的原理，使用耐高温 Taq 酶而未使用普通 DNA 聚合酶的主要原因是_____。23 ②研究者用 HindⅢ和 BamHⅠ两种限制酶处理 nirS 基因与 p 质粒，在_____酶的作 用下进行体外连接，用连接产物转化大肠杆菌 DH5α，在含庆大霉素的培养基中 进行培养并提取质粒，如果用 HindⅢ和 BamHⅠ双酶切，得到两个片断电泳结 果分别与_____电泳结果基本一致，说明获得重组质粒 pYP4S。 ③将 pYP4S 转化到野生菌株 YP4 中形成工程菌 YP4S，培养后进行 PCR 鉴定。为 鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行 PCR 鉴定。图 1 所示为甲、乙、丙 3 条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR 鉴定时应选择的最佳一对引物组合是_____。某学生错选了图中的另外一对引物 组合，扩增出长度为 2.1kb 的片段，原因是_____。 (3) 检测工程菌 YP4S 除氮的效能 ①工程菌株 YP4S 在已灭菌的模拟污水中培养 36 h 后，检测结果如图 2。结果表明 _____。 ②要进一步证明工程菌对含氮污水治理更有效，应_____。 5. （9 分）请阅读科普短文，并回答问题。 绿色植物及光合细菌都靠叶绿素进行光合作用，但一种生长在盐湖里的嗜盐菌，虽 没有叶绿素，也能在厌氧光照条件下同化 CO2。 美国加州大学科学家施特克尼斯通过长期的研究，发现嗜盐菌在低氧和日光下生长， 其质膜可产生明显的斑块。因为斑块的颜色与人眼的感光物质视紫红质很相似，所以叫 紫膜。紫膜中仅含一种蛋白质，其结构也与视紫红质相似，因而被命名细菌视紫红质。 它能把接受到的阳光大约 10%变成其他形式的能，这比叶绿素能够转换约 30%的光能 要低。 细菌视紫红质在冰冻撕裂复制物中，具 有清楚可认的六角形晶格。紫膜中，细菌视 紫红质占 75%（另有 25%为类脂），分子量 为 26,000 道尔顿。每一分子细菌视紫红质含 有一分子视黄醛，由它吸收光子并引起一 系列光化学反应循环。这种蛋白质分子以 7 个 α 螺旋跨膜，每个螺旋长约 4 nm（如右 图）。紫膜蛋白在吸收光子引起光化学反应 循环的同时，能产生跨紫膜的质子泵作用，即当光照射时，视黄醛放出 H+到细胞膜外， 失去 H+的视黄醛又从细胞质内获得 H+，在光照下又被排出。这样反复进行，形成膜内24 外 H+梯度，当膜外的 H+通过膜中的 H+-ATP 酶返回时，合成 ATP，用于同化 CO2。在 太阳照射时，每个细胞在一秒钟内大约可以使 250 个 H+转移到细胞膜外。嗜盐菌就这 样依靠光能生活着。 (1) 将你学过的植物光合作用知识与本文中介绍的新知识进行比较，将不同之处填入下 表。 捕获光能的场所 捕获光能的物质 教材知识 ①________ ②________ 本文知识 ③________ ④________ (2) 你认为上述材料中该生物体内进行的代谢过程能称作光合作用吗？请陈述理由 ______。 (3) 如果采用基因工程技术改造植物，使植物叶肉细胞的类囊体膜上同时表达出细 菌视紫红质和叶绿素，能否提高植物的光合作用效率？写出你的判断依据 ______。 (4) 基于上述资料内容，你认为可围绕生物代谢进行哪些方面的研究______。 本页无试题，可作为草稿纸 BC 16．（13 分） (1) ①提供生长因子（或补充培养基中动物细胞生长需要的未知营养） ②单 ③吴茱萸碱抑制 BGC-823 细胞增殖（1 分）；作用效果与作用时间（1 分）和浓度呈正 相关（1 分） (2) G2/M (3) ①p53；转录；②上升；程序性 (4) EVO 通过促进细胞周期抑制蛋白 p53 基因表达，从而抑制细胞周期蛋白 Cdc25C 基因 表达（1 分），诱导胃癌细胞阻滞于 G2/M 期，抑制胃癌细胞增殖（1 分）；同时，EVO 促进细胞凋亡蛋白 Caspase-3 基因表达，促进胃癌细胞凋亡（1 分） 21．（10 分） (1) 催化 (2) ①DNA 复制； PCR 过程中 DNA 在高温下解链，这样的高温下，普通的 DNA 聚合酶的生物活性丧 失 ②DNA 连接；p 质粒和插入片段（目的基因）25 ③乙和丙；目的基因反向连接 (3) ①工程菌株除氮效果优于野生菌 ②Ⅰ．工程菌 YP4S 与野生菌分别处理实际污水 36 h（1 分） Ⅱ．检测除氮率（1 分）