天添资源网 http://www.ttzyw.com/
微生物的实验室培养
一、选择题
1．下列关于微生物的营养，说法正确的是( )
A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源
B．凡是碳源都能提供能量
C．除水以外的无机物仅提供无机盐
D．无机氮源也可能提供能量
解析：选D 对一些微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。CO2和N2是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。
2．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是( )
①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线消毒 ⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒
A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥
C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤
解析：选A 培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底地灭菌的效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；为不破坏牛奶中的营养成分，可采用巴氏消毒。
3．(江苏高考)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是( )
A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖
B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上
解析：选D 在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待压力表的压力降到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子。倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后，再用其挑取菌落。在微生物的培养中，一般在皿底上用记号笔做标记。
4．下列有关平板划线法操作的叙述，错误的是( )
A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
B．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种
C．在每一区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液
D．划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
天添资源网 http://www.ttzyw.com/
天添资源网 http://www.ttzyw.com/
解析：选C 在用平板划线法分离大肠杆菌的实验中，接种环取菌种前灼烧的目的是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种；划线结束后仍需灼烧接种环，是为了避免细菌污染环境和感染操作者；从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。
5．为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述错误的是( )
A．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法
B．临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上
C．临时保藏菌种容易被污染或产生变异
D．对于需要长期保存的菌种，可以采用低温－4 ℃保藏的方法
解析：选D 对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏法，即在3 mL甘油瓶中加入1 mL甘油后灭菌，将1 mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20 ℃的冷冻箱中保存。
6．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时( )
①可以用相同的培养基 ②都需要使用接种针进行接种 ③都需要在酒精灯火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌
A．①② B．③④
C．①③ D．②④
解析：选C 平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法采用接种针或接种环进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作；进行接种操作时，要进行无菌操作，需要在酒精灯火焰旁接种，避免空气中的微生物污染培养基；平板划线法一般用于分离菌体而不能计数活菌。
7．下表是对四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，正确的是( )
选项
项目
硝化细菌
乳酸菌
根瘤菌
衣藻
A
能源
NH3
乳酸
N2
光能
B
碳源
CO2
糖类等
糖类等
CO2
C
氮源
NH3
N2
N2
NO
D
代谢类型
自养需氧型
异养厌氧型
自养需氧型
自养需氧型
解析：选B 从能源来看，硝化细菌的能源是氧化氨气为硝酸盐过程释放的能量，乳酸菌和根瘤菌需糖类等有机物供能；从氮源看，乳酸菌需要NH、NO；从代谢类型看，根瘤菌为异养需氧型；从碳源看，硝化细菌与衣藻需CO2，乳酸菌和根瘤菌需要糖类等有机物。
8．下面是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是( )
天添资源网 http://www.ttzyw.com/
天添资源网 http://www.ttzyw.com/
A．在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌
B．划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上
C．接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的
D．第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数
解析：选C 在每次划线前后都要对接种环进行灭菌；进行划线操作时，左手将培养皿的皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖；注意接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的；第1区和第5区的划线不能相连。
9．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理，下列叙述正确的是( )
A．培养基分装到培养皿后进行灭菌
B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线
C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养
D．培养过程中每隔一周观察一次
解析：选B 在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板；转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌，杀灭接种环上残留的菌种，再进行划线；接种后的培养皿应放置在恒温培养箱中培养；微生物生长、繁殖较快，在培养过程中一般要隔天观察一次。
10．科学家通过实验发现了细菌的快速进化过程。人们发现，用肉汤培养假单胞杆菌，如果肉汤保持不动，不久后，在肉汤的不同部位，如表面、底部或其他部位，细菌的形态发生了如图所示的变化，出现一定数量的变异株。下列有关说法错误的是( )
A．这个实验说明了细菌在不同的小环境中发生了进化
B．细菌的生命周期短，繁殖速度快，容易受到外界环境影响而发生变化
C．用静置的肉汤培养FS细菌，其菌落形状将趋于一致
D．用不断摇动的肉汤培养SM细菌，不会出现FS细菌和WS细菌
天添资源网 http://www.ttzyw.com/
天添资源网 http://www.ttzyw.com/
解析：选C 分析题干信息可知，最初的SM细菌在静置的肉汤表面繁殖，一段时间后，有一部分在肉汤底部繁殖，这部分可能向厌氧方向进化，故细菌在不同的小环境下可发生进化。细菌生命周期短，繁殖速度快，容易受外界环境因素(如温度、氧气)的影响。用静置的肉汤培养FS细菌，该细菌也有可能向不同方向进化，如进化成WS细菌。不断摇动，肉汤中的溶氧会抑制厌氧型的FS细菌；不断摇动，容器与肉汤无固定接触面，WS细菌无法附着生长繁殖。
二、非选择题
11．(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑________、________和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、________、________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行________(填“消毒”或“灭菌”)；操作者的双手需要进行清洗和________(填“消毒”或“灭菌”)；空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能________________________________________________________________________。
(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的__________________________________。
(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的________________________________________________________________________。
(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_______________________________。
解析：(1)大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点，培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。(2)对培养基和培养皿应进行灭菌，操作者的双手需要进行清洗和消毒。紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构。(3)稀释涂布平板法要先将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，操作中应保证样品稀释的比例合适。(4)对获得的纯菌种可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。(5)检测培养基是否被污染的方法是将未接种的培养基在适宜条件下进行培养，观察是否有菌落形成。
答案：(1)温度 酸碱度 易培养 生活周期短 (2)灭菌 消毒 损伤DNA的结构 (3)比例合适 (4)鉴定(或分类) (5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
12．下面为牛肉膏蛋白胨培养基的成分列表，据此回答：
成分
牛肉膏
蛋白胨
NaCl
H2O
含量
0.5 g
1 g
0.5 g
100 mL
(1)蛋白胨在培养基中的作用是_________________________________。
(2)要用此材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是____________。
(3)确定表中各成分含量依据的原则是_________________________________________。
(4)培养基配制好后，分装前应进行的工作是___________________________________。
天添资源网 http://www.ttzyw.com/
天添资源网 http://www.ttzyw.com/
(5)从配制培养基直到培养完成，所采用的预防杂菌污染的方法有_________________________________________________________________________。
(6)在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是____________________________________________________________________。
解析：蛋白胨中含有大量的蛋白质降解而成的多肽类物质等，因而在培养基中提供碳源、氮源和生长因子。细菌菌落是在固体培养基上形成的。确定各营养成分含量要依据所培养的微生物的需要。培养基配制好后，首先要调整pH，然后再分装，整个操作过程都要保证无杂菌污染。
答案：(1)提供碳源、氮源、生长因子 (2)琼脂(凝固剂) (3)所培养微生物对各营养成分的需要量 (4)调整pH (5)对培养基进行高压蒸汽灭菌、灼烧接种环、酒精棉擦手、在火焰旁接种、在火焰旁迅速用棉塞塞住试管口 (6)扩大接种面积
13．在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。实验基本步骤如下：
―→―→―→
请回答下列有关问题：
(1)配制培养基时，各成分含量确定的原则是________________________。不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是_______________________________。
(2)倒平板的适宜温度是50 ℃左右，原因是_____________________________。待平板冷凝后，要将平板倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止________________________。
(3)纯化菌株时，若使用稀释涂布平板法进行接种，应选择的涂布工具是图中的________；若使用平板划线法进行接种，应选择的接种工具是图中的________。
(4)划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________________________________________________________________________。
(5)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。
天添资源网 http://www.ttzyw.com/
天添资源网 http://www.ttzyw.com/
解析：培养基中各成分含量要根据微生物的生长需要来确定。微生物生长需要一定的pH，所以培养基装瓶前需要调节pH。由图可知，A为接种环，B为涂布器，C为胶头滴管，D为接种针，稀释涂布平板法应选择的涂布工具是B，平板划线法应选择的接种工具是A。第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成此现象的原因可能有两个：一是接种环灼烧后未冷却，菌种接触到高温的接种环而死亡；二是划第二划线区域第一条线时未从第一区域末端开始。有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，因此，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。
答案：(1)所培养微生物对各营养成分的需要量 调整pH (2)温度过高会烫手，过低培养基又会凝固 皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 (3)B A (4)①接种环灼烧后未冷却 ②划线未从第一区域末端开始 (5)灭菌
天添资源网 http://www.ttzyw.com/
微信/支付宝扫码支付